Orgaanisen kemian laudaturtyöt 3.paketti

Transkriptio

1 Orgaanisen kemian laudaturtyöt 3.paketti Orgaanisen kemian laboratorio Kemian laitos Helsingin yliopisto 2005

2 Laudaturtöiden synteesit ja analyysi Laudaturtöissä tehdään itsenäisesti viisi synteesiä sekä kvalitatiivinen analyysi. Analyysi sisältää vähintään 3 tuntematonta ainetta, jotka opiskelijan tulee erottaa toisistaan ja tunnistaa fysikaalisten vakioiden ja spektroskooppisten menetelmien perusteella. Analyysistä laaditaan erillinen selostus ja se kuuluu kaikkiin työpaketteihin. Jokaiseen synteesipakettiin kuuluu sekä suojakaasun käyttöä vaativa työ että tuotteen flash-kromatografinen puhdistus. Lue etukäteen näihin liittyvät monisteet. LAH reduction of p-anisaldehyde ,4-Diphenyl-3-buten-2-one Methoxymethylbenzoic acid... 9 Phenetole Diphenylacetaldehyde Analysis

3 Töiden suunnittelu Työaika on klo Töihin tulisi varata riittävästi aikaa eikä poissaolo, pakollisia lukuun ottamatta (tentti), ole suositeltavaa. Tutustu työohjeisiin etukäteen ja tee itsellesi työsuunnitelma niin, että työt sujuvat joustavasti. Erityisesti pitää ottaa huomioon liuottimien ja lasitavaroiden kuivaamiseen varattava aika (yön yli). Jos useassa työssä käytetään samaa liuotinta, kuivaus voidaan tehdä samaan aikaan. Osa lähtöaineista punnitaan varastossa valmiiksi ja ne saa assistenttihuoneesta työn tenttimisen jälkeen. Synteesituotteiden analysointi tehdään oman synteesipaketin mukana tulevan listan mukaan, ei synteesiohjeen mukaan. Maksut Opiskelijoilta peritään laudaturtöistä 9,50 maksu. Maksu sisältää käytettävät kemikaalit, suodatinpaperit yms. Töiden loputtua preparaattori tarkastaa palautetut tavarat ja tekee laskun puuttuvasta tai rikkoutuneesta lasitavarasta. Kaikki maksut maksetaan samalla, preparaattorilta saatavalla yhteenvetolaskulla välittömästi töiden päätyttyä. Merkinnät Työt kirjataan opintorekisteriin vasta, kun kuitti suoritetusta maksusta on esitetty opintotoimistossa. Pyydä assistenttia tarkistamaan töiden loputtua, että kaikki suoritukset on merkitty opiskelijakorttiisi! Laudaturtöiden työselostuksia otetaan vastaan muutama päivä kurssin loppumisen jälkeen. Tällöin selostukset palautetaan Orgaanisen kemian laboratorion aulassa sijaitsevaan postilaatikkoon, johon assistentit tuovat myös korjattavat/hyväksytyt selostukset. Selostusten korjaus loppuu ennalta ilmoitettuna päivänä, jonka jälkeen assistenteille tuotuja uusia tai korjattuja selostuksia ei oteta vastaan. Työskentelyajat ja työpaikka Laboratoriossa voi työskennellä klo Tyhjennä ja siisti oma työpöytäsi ja vetokaappisi päivittäin lopettaessasi työskentelyn. Laitteiston saa jättää yöksi vetokaappiin vain assistentin luvalla. Töiden tenttiminen ja suoritus Lue työohjeet huolella ja suunnittele aikataulusi joustavaksi siten, että pitkien refluksointien ja tislausten aikana valmistaudut seuraavaan työhön, tai teet toista synteesiä. Työt voit tehdä haluamassasi järjestyksessä. Aloita työt aamulla, ja varaa työhön riittävästi aikaa. Suunnittelussa on syytä ottaa huomioon myös lähtöaineiden puhdistaminen, ja siihen tarvittava aika. HUOM! Absoluuttisen eetterin valmistus vie vuorokauden. Valmistaudu etukäteen kuhunkin työhön! Synteesit aloitetaan tenttimällä suoritettava työ suullisesti assistentille. Tällöin käydään läpi synteesin mekanismi sekä synteesin käytännön suoritus. Erityistä huomiota kiinnitetään työturvallisuuteen, johon liittyviä kysymyksiä tulee kerrata Simosen monisteesta (Tapio Simonen: Orgaanisen kemian synteettisistä työmenetelmistä ja työturvallisuudesta sekä orgaanisesta analytiikasta). Työtä tentittäessä esitetään myös esitäytetty synteesikaavake, johon on laskettu ja kirjattu tarvittavat aineet ja niiden määrät (kiinteät grammoina, ja nestemäiset grammoina ja millilitroina!). Työn tentittyäsi saat assistenttihuoneesta synteesin lähtöaineet, joista eräät on puhdistettava ennen käyttöä. Punnitse tai mittaa käyttämäsi ainemäärä tarkasti. Synteesituotteiden analysointi Synteesituotteiden analysointia varten perehdy assistenttihuoneessa oleviin ohjeisiin ennen kuin tulet opettelemaan jonkin laitteen käyttöä. NMR-näytteitä ajetaan muutamana päivänä kurssin aikana. NMR-ajotilaus (NMR-putki, jossa näyte on liuotettuna deuterokloroformiin sekä lappu, jossa on opiskelijan nimi, tuotteen rakennekaava ja assistentin kuittaus) jätetään NMR- 3

4 putkitelineeseen, joka on työsalin pöydällä. Ajetut spektrit ja putket tuodaan ajon jälkeen samaan paikkaan takaisin. Synteesituotteiden ja selostusten palautus Synteesiä suoritettaessa pidetään laboratoriopäiväkirjaa, jonka pohjalta kirjoitetaan työselostus. Päiväkirjaa pidetään sitä mukaa, kun työ edistyy, eikä jälkikäteen ja se palautetaan selostuksen yhteydessä. Selostuksessa (mieluiten koneella kirjoitettu) esitetään reaktiomekanismi, laboratoriopäiväkirja (työohjeiden mukana saat yhden mallikappaleen, voit kirjoittaa vastaavat asiat myös konseptipaperille), synteesikaavake täytettynä, ja vastaukset työohjeen kysymyksiin. Analyysitulokset nidotaan mukaan asianmukaisesti tulkittuina. Synteesituotteet ja selostukset on luovutettava tarkastettavaksi synteesin valmistuttua. Jos selostusta ei ole palautettu viikon sisällä kokeellisen työn valmistumisesta, työstä annettavaa arvosanaa alennetaan 0,5 pistettä jokaista 3 päivän viivettä kohti. Työn uusiminen pudottaa arvosanaa yhdellä pisteellä. Kaikki työt ja myös selostukset tulee saada HYVÄKSYTYIKSI ennen kurssin loppua. Enintään kolme työtä voi olla kesken yhtä aikaa. Kurssin päätyttyä selostuksia ei enää hyväksytä. Jos näyttää siltä, että synteesi epäonnistuu, niin kannattaa heti tulla neuvottelemaan assistentin kanssa, eikä mitään saa heittää pois synteesin aikana. HUOM! Laudaturtöiden selostukset on kirjoitettava koneella ja molekyylien rakenteet sekä reaktiomekanismit on piirrettävä piirto-ohjelmalla (esim. ChemDraw, ISIS/Draw, ChemSketch). Laboratorion koneisiin on asennettu jokin em. piirto-ohjelmista. Suositeltavaa on työskennellä kokopäiväisesti laboratoriossa alusta alkaen. Varaudu myös epäonnistuneiden synteesien uusimiseen ja mahdolliseen jonotukseen analyysilaitteille kurssin loppupuolella. Mikäli kurssin aloittanut opiskelija sairastuu tai muutoin estyy tekemästä töitä loppuun kurssin aikana, on työpaikan luovuttamisesta sovittava välittömästi (ass. huone p ). "Paikkaustyöpaikkaa" voi tiedustella lukuvuoden muilta Perustyöt II -kursseilta kunkin kurssin alettua. Etuoikeutetussa asemassa Perustyöt II -kursseille ovat ensimmäistä kertaa kurssille osallistuvat opiskelijat. Työvälineet Jokaisen opiskelijan työpaikka sisältää peruslasitavarat, joiden kunnosta opiskelija on vastuussa. Ensimmäisenä päivänä ennen töiden aloittamista jokainen kurssilainen kuittaa preparaattorilta itselleen oman kaapin töiden ajaksi. Kaappi on luovutettava viimeistään viimeisenä työpäivänä, lasitavarat puhtaina. Sen jälkeen luovuttamatta jääneestä kaapista peritään erillinen 42 :n maksu preparaattorin työstä. Erikoislasitavara sekä lasitavarat rikkoutuneiden tilalle haetaan jakeluvarastosta BK149, ja siitä preparaattori pitää kirjaa erikseen. Rikkoutunut lasitavara on palautettava varastoon. Varasto on avoinna Sähköhauteen, mikrotislausosan, Vigreaux-kolonnin, flash-kromatografiavälineet ja NMR-putken saat tarvittaessa kuittausta vastaan assistenttihuoneesta, jonne ne myös palautetaan puhtaina välittömästi käytön jälkeen. Välineet, jotka opiskelijan on tuotava itse työtakki kumikäsineet (voi myös ostaa kemikaalivarastosta, laskutetaan kurssin loputtua) muistiinpanovälineet etikettilappuja tulitikut tai sytytin Terävä linkkuveitsi on tarpeen imuletkujen ja kumiletkujen leikkaamiseen sekä natriumin paloitteluun. 4

5 LAH reduction of p-anisaldehyde Reagents Safety Notes Equipment 0.8 g of of LiAlH 4 (one pellet) LiAlH 4 is flammable, handle it only in dry conditions. Don't grind the reflux apparatus with two-necked flask and a 1 ml of anisaldehyde pellet under air! septum Diethyl ether is flammable and an ballons irritant. three-way stopcock syringes + needles ice-water bath Procedure All apparatus must be thoroughly dried in a hot oven (>120 C) before use. Flush a 50 ml twoneck round-bottomed flask (a magnetic stirrer bar inside) with a stream of argon for about 2 minutes. Close one neck with a septum and the other with a stopper. LiAlH 4 is weighed directly inside the flask, and the flask is kept closed. The flask is equipped with a reflux condenser, and an argon balloon is put in top of the condenser by a three-way stopcock. A vacuum is sucked into the flask via a three-way stopcock and the flask is filled with argon from the balloon. Repeat this operation three times and leave the stopcock open to the balloon. Add the dry ether (25 ml) through the septum with a syringe needle over LiAlH 4 at such a rate that the mixture refluxes gently. Stir for five minutes and add anisaldehyde dropwise through a syringe needle (caution: vigorous reaction). Allow the mixture to stir at room temperature for about one hour after the addition. The reaction must be controlled with TLC (small sample from reaction mixture is put in the test-tube containing water. Add ether, shake and take TLC-sample from the organic phase). Attention! If you have used LiAlH 4 -pellet, make sure it is completely reacted before the next step. Isolation and purification Cool the flask in an ice-water bath for 10 minutes, and add about 1 ml of water through the septum (caution!). Stir the mixture for about 5 minutes, and add about 6 ml of 2 M sodium hydroxide in the same way. Stir for about 5 minutes. Add 25 ml of ether, shake gently and decant the ether from the residual inorganic salts. Repeat with further 25 ml of ether. Combine the ether phases and dry with Na 2 SO 4. Remove the solvent on the rotary evaorator. Yield is 80%. Product characterization Run an IR spectrum of the product. 5

6 4,4-Diphenyl-3-buten-2-one Grignard and Organolithium Reagents Although organometallic reagents involving many different metals have found application in organic synthesis, those based on magnesium and lithium have probably found the widest use. Organomagnesium reagents, more commonly known as Grignard reagents after their discoverer the Frenchman Victor Grignard, who received the Nobel prize in 1912, are particularly suited for use in the organic laboratory since they are easily prepared by reaction of an alkyl or aryl halide with magnesium metal in an ether solvent. Organolithium compounds on the other hand are more difficult to handle, requiring the use of rigorously anhydrous solvents under an inert atmosphere. They are made by the reaction of halides with lithium metal, although many organolithium reagents are commercially available as stock solutions in inert solvents. Whilst, for practical purposes the structures of organometallic compounds can be regarded as monomeric, in fact the structures are much more complicated, and involve aggregates. Grignard Reagents: Addition of Phenyl Magnesium Bromide to Ethyl Acetoacetate Ethylene Acetal Esters react readily with an excess of a Grignard reagent to give tertiary alcohols. This experiment illustrates the addition of phenylmagnesium bromide, prepared from bromobenzene and magnesium turnings, to the ethylene acetal of ethyl acetoacetate. It is essential for the reactive ketone group of ethyl acetoacetate to be protected from reaction with the Grignard reagent. In a second, optional step the ketal protecting group is removed by acid hydrolysis, to give the tertiary keto alcohol which spontaneously dehydrates under the acidic conditions to the -unsaturated ketone 4,4-diphenylbut-3-en-2-one. The final product can be purified by column chromatography if desired. Further Reading: Morrison & Boyd p. 883; Streitwieser & Heathcock p. 497; Carey & Sundberg p. B259; McMurray p. 594; Fessenden & Fessenden p. 652; March p. 825; Vollhardt p. 807; Wade pp. 424, Reference: This procedure is based on D.R. Paulson, A.L. Hartwig. 6

7 Reagents Safety Notes Equipment 1. Grignard reagent reflux apparatus with addition funnel 0.45 g of magnesium turnings flammable flammable, irritant separation/extraction suction filtration dry diethyl ether corrosive, lachrymator apparatus 1-2 crystals iodine irritant apparatus for column 2.62 g of bromobenzene irritant cromatography 1.45 g of ethyl acetoacetate flammable ketal flammable light petroleum 2. Hydrolysis conc. hydrochloric acid acetone diethyl ether sodium bicarbonate solution (saturated) silica gel corrosive flammable flammable, irritant irritant dust Procedure 1. Preparation and reaction of the Grignard reagent All apparatus must be thoroughly dried in a hot (>120 C) oven before use, for example over night. Set up a 100 ml round bottomed flask with a dropping funnel, a stirring bar and a reflux condenser equipped with a calcium chloride tube. Then add the magnesium turnings, 10 ml of dry ether and a chrystal of iodine to the flask. Place 10 ml of dry ether and the bromobenzene in the addition funnel, and add a few drops of this solution to the magnesium. Start the stirrer, and wait until the formation of the Grignard reagent starts. The start of the reaction will be apparent; the ether starts to reflux, and takes on a gray-brown appearance. Add the remaining bromobenzene solution, diluted with an extra 20 ml of ether, at such a rate as to maintain a gentle reflux. After the addition is complete, reflux the mixture with stirring on a hot water bath for about 10 min. Cool the flask in an ice bath, and then add a solution of the ethyl acetoacetate ketal in 10 ml of dry ether dropwise. After the addition is complete, stir the mixture for a further 30 min at room temperature. After a while, the product precipitates causing the magnetic stirrrer to jam; let the mixture rest for 30 min. Then add 20 ml of ice-water to the flask. When the ice has melted, add a further 10 ml of ether, and stir the mixture until the gummy solid dissolves. Some extra ether may be needed, also add some dilute HCl until the solution is acidic. Cool the flask during the addition of acid. Transfer the mixture to a separatory funnel, and separate the layers. Extract the aqueous layer with 10 ml of ether, combine the ether layers, wash them with 10 ml of water and dry over MgSO 4. Filter off the drying agent and evaporate the filtrate on the rotary evaporator to leave a yellow-orange oil. Record the yield, mp, IR and NMR (CDCl 3 ) 7

8 2. Hydrolysis of the ketal: 4,4-diphenylbut-3-en-2-one Place the above tertiary alcohol, 1 ml of conc. HCl, 25 ml of acetone and 1.5 ml of water in a 50 ml round bottomed flask. Fit a condenser, and heat the mixture under reflux for 1 hour. Transfer the cooled mixture to a separatory funnel, add 25 ml of water, and extract it with 2x15 ml of ether. Combine the ether layers, wash them with 15 ml of saturated sodium bicarbonate solution (Care! CO 2 gas evolved), 15 ml of water, and dry them over MgSO 4. Filter off the drying agent, and evaporate the filtrate on the rotary evaporator to leave the crude product. Isolation and purification Purify the product by column chromatography on silica gel using CH 2 Cl 2 as eluent. Remove the eluent and dry the product at the oil pump. Product characterization Record the yield, and the IR (CHCl 3 ) and NMR (CDCl 3 ). The yield should be 20 %. Questions 1. Write the reaction mechanism for the acid hydrolysis of the acetal protecting group, and the subsequent dehydration of the resulting keto alcohol. 2. Assign the spectroscopic data for your product(s). 3. Suggest an alternative synthesis of 4,4-diphenylbut-3-en-2-one. 8

9 4-Methoxymethylbenzoic acid A convenient procedure for generating bromine radicals utilizes N-bromosuccinimide as the bromine source and benzoyl peroxide as the initiator. Unlike most benzylhalides, the 4-bromomethylbenzoic acid prepared in this experiment is not lachrymatory, making it suitable as a laboratory procedure. Nonetheless, the product is a potential skin irritant and due caution should be exercized in its handling. Reagents Safety Notes Equipment 1. Preparation of 4-bromomethylbenzoic acid stirrer/hotplate reflux apparatus 2.72 g of 4-methylbenzoic acid 3.60 g of N-bromosuccinimide 0.20 g of benzoyl peroxide chlorobenzene light petroleum (bp C ) - toxic - irritant - an oxidizing agent and liable to explode if heated or ground as the dry solid. Handle with extreme caution! - flammable - flammable 2. Preparation of 4-methoxymethylbenzoic acid methanol potassium hydroxide pellets - flammable, toxic - corrosive Preparation of 4-bromomethylbenzoic acid Procedure: place the 4-methylbenzoic acid and N-bromosuccinimide in a 100 ml round bottomed flask. Add the benzoyl peroxide, taking care that none sticks to the ground glass joint of the flask. Finally, add 25 ml of chlorobenzene by pipet and wash down any solids which may be adhering to the sides of the flask, paying particular attention to the ground glass joint. Arrange the apparatus for reflux and heat gently for 1 h with occasional (ca. every 5 min) vigorous swirling in order to ensure good mixing. Isolation and purification: cool the flask and contents in an ice bath (ca. 10 min) and filter off the precipitated products with suction. Wash the residue on the funnel with light petroleum (3 x 10 ml), and transfer the solid to a beaker. Add water (50 ml), stir the the slurry thoroughly to dissolve the succinimide present, and filter the mixture under suction, washing the solid residue successively with water (2 x 10 ml) and light petroleum (2 x 10 ml). Leave the product on the 9

10 funnel with suction to dry as thoroughly as possible and record the yield and melting point of the crude material. The crude material is of sufficient purity to use in the following experiment but, if time permits, may be recrystallized from ethyl acetate. Product charaterization: measure the melting point and run IR and NMR spectra of your product. Preparation of 4-methoxymethylbenzoic acid Procedure: place the potassium hydroxide pellets and the methanol in a 100 ml round bottomed flask and the 4-bromomethylbenzoic acid prepared in the previous experiment. Set the apparatus for reflux with a calcium chloride guard tube and heat gently for 45 min. Remove the methanol at reduced pressure on the rotary evaporator with gentle warming and dissolve the alkaline residue in water (30 ml). Isolation and purification: acidify the mixture with dilute hydrochloric acid and filter the precipitated product. Wash the solid with light petroleum (2 x 15 ml) and and dry with suction on the funnel. Record the yield and melting point of your crude product and then recrystallize it from water. As before, filter the precipitated product with suction, wash the crystalline solid with light petroleum (2 x 15 ml) and dry on the funnel with suction. Compare the purified product's melting point with that of the crude material. The yield is 46% (calculated from 4-methylbenzoic acid). The melting point is 123 C. Product characterization: measure the melting point and run IR and NMR spectra of the purified product 10

11 Phenetole The objective of the experiment is to prepare phenetole by Williamson synthesis from phenol using a phase-transfer catalyst. The work of Makosza, Starks, and other investigators has led to the use of phase-transfer catalysts to accelerate reactions in two-phase systems. For example, the displacement of halide ions by nucleophiles such as cyanide can be catalyzed by quaternary ammonium ions, which transport cyanide ion from the aqueous to the organic phase where it reacts with the alkyl halide. If the method works for cyanide ion, it should work for other nucleophiles as well. The old and familiar Williamson synthesis of ethers involves the displacement of halide ion (and other leaving groups) by nucleophiles such as alkoxide and aryloxide ions. It is most successful in combining a primary halide with a sodium alkoxide or aryloxide. Sodium alkoxides are usually prepared by adding bits of sodium metal to the corresponding alcohol. Then the alkyl halide is added and the mixture is refluxed for five hours or so to make the ether. Sodium aryloxides can be prepared by treating the corresponding phenol (which is much more acidic than an alcohol) with the less hazardous base, sodium hydroxide. Unfortunately, alkyl halides will not dissolve in an aqueous solution of NaOH, so the aryloxides are more often prepared by adding sodium to the phenol in an organic solvent such as ethanol or benzene, followed by the addition of the alkyl halide. When the phase-transfer-catalysis technique is used, however, sodium phenoxide is prepared in the aqueous phase by mixing the phenol with sodium hydroxide, while the alkyl halide is dissolved in an organic solvent such as methylene chloride. When the catalyst is added and the two-phase system is stirred, the phenoxide is carried into the organic phase by the quaternary ammonium cation (Q + ), where it can react with the halide to form a phenyl ether. Return of Q + to the aqueous phase to pick up more ArO- completes the cycle. Literature: Lehman, J. W. Operational Organic Chemistry, p. 270 Reagents Safety Notes Equipment 25 mmol phenol Phenol is toxic and corrosive and can reflux apparatus 50 mmol ethyl severely burn the skin and eyes; ingestion separation/extraction bromide of as little as one gram has proven fatal. distillation apparatus 1 g of tetrabutyl ammonium hydrogensulphate Avoid any contact with skin, eyes, and clothing. Ethyl bromide is toxic by ingestion, inhalation, and skin absorption; it is also flammable and the vapor is irritaing to eyes and lungs. Avoid contact with the liquid, do not inhale vapors, and keep away from heat or flames. Methylene chloride vapors may be harmful and the liquid is dangerous to the eyes; avoid prolonged contact with the liquid and inhalation of vapors. 11

12 Procedure Calculate the mass of crystalline phenol or 90% aqueous phenol needed to provide 25 mmol of phenol, and the volume of 50 mmol of ethyl bromide. In a 100 ml round-bottomed flask, dissolve 25 mmol of phenol in 25 ml of 2 M aqueous sodium hydroxide and add 25 ml of methylene chloride, 50 mmol of ethyl bromide (volatile!), and 1 g of of tetrabutylammonium hydrogensulphate. Reflux the mixture gently (in a water bath) for about four hours with vigorous mechanical stirring, using two reflux condensers in series. Follow the process of the reaction by TLC in methyl chloride. Isolation and purification Separate and save the organic (lower) layer, then extract the aqueous layer with two 20 ml portions of methylene chloride and combine the extracts with the reserved organic layer. Wash the organic solution with 25 ml of 2 M aqueous sodium hydroxide, then with 25 ml of saturated aqueous sodium chloride. Dry the organic solution and evaporate the solvent using a solvent trap. Purify the crude phenetole by micro distillation (bp. 170 C). A dense white fog may form in the boiling flask near the end of the distillation - heating should be stopped at this point. Weigh the product. The yield is 80%. Product characterization Run a GC of the product. 12

13 Diphenylacetaldehyde Literature: Danilov, S.; Venus-Danilova, E. Chemische Berichte 1926, 59B, (procedure on page 1041). Reagents 8.0 g of hydrobenzoin 40.0 g of oxalic acid Equipment reflux apparatus separation/extraction reduced pressure distillation apparatus Procedure 8 g of of hydrobenzoin (mp. 134 C) and 40 g of of crystalline oxalic acid are heated in an oil bath for 4 hours (oil bath temperature: 156 C). Isolation and purification The obtained product is extracted with ether, washed with sodium hydroxide solution and dried with sodium sulphate. It is first distilled under reduced pressure at a temperature of C/20 mmhg. The distilled fluid is distilled anew (if necessary), at a temperature of C/24 mmhg. The yield is 60%. Product characterization Run IR and NMR spectra of the product. 13

14 Analysis Analysis consists of at least 3 substances which are to be separated and purified by extraction and distillation/recrystallisation and identified by physical properties and spectroscopic methods. When analysis is carried out and all the components are identified, the student has to write a report, which includes analysis form (names, physical data, structures etc) written report describing separation and identification processes for each substance a drawing of separation scheme describing overall separation process melting point printouts IR- and NMR-spectra with interpretation The report is returned to the assistants, who check whether the analysis is correct and whether the report is accepted. If the analysis is not correct, assistant will help to find out the problematic or uncertain parts of the separation / identification process. 14