Penicillium brevicompactum sienen entsyymiaktiivisuuden säilyminen ympäristönäytteissä

Koko: px

Aloita esitys sivulta:

Download "Penicillium brevicompactum sienen entsyymiaktiivisuuden säilyminen ympäristönäytteissä"

Viljo Tuominen
8 vuotta sitten
Katselukertoja:

Sisäilmastoseminaari 2014 Helsingin Messukeskus 13.

entsyymiaktiivisuuden säilyminen ympäristönäytteissä

1 Sisäilmastoseminaari 2014 Helsingin Messukeskus Penicillium brevicompactum sienen entsyymiaktiivisuuden säilyminen ympäristönäytteissä Salmela A, Moisa J, Reponen T, Pasanen P Ympäristötieteen laitos

2 Sisältö Johdanto Mikä on Mycometer? Aineisto ja menetelmät Entsyymiaktiivisuus ja sen muutos näytteissä Johtopäätökset Anniina Salmela

3 Johdanto Rakennuksen kosteus- ja/tai homevaurion korjaussuunnittelun ja korjaamisen kannalta on syytä tietää vaurion laajuus ja sijainti Vaurio voi olla vanha, jolloin siinä ei ole enää aktiivista mikrobikasvua, mutta se kuitenkin heikentää rakennuksen sisäilman laatua Helsingin Uutiset Vaurio ja sen laajuus voidaan tutkia hyödyntämällä sieni-itiöiden kestävyyttä, minkä vuoksi vaurio voidaan löytää pitkänkin ajan kuluttua Jotta voidaan arvioida nopeasti mikrobikontaminaation olemassaoloa ja laajuutta tarvitaan soveltuvia pika-analyysimenetelmiä Anniina Salmela

4 Johdanto On esitetty, että vaurion korjaamisen kannalta sienilajien tunteminen ei ole välttämätöntä ja näin ollen entsyymiaktiivisuuteen perustuva menetelmä antaisi riittävän tiedon mikrobikontaminaation laajuudesta Sienten biomassa voidaan määrittää mittaamalla β-n-asetyyliheksoaminidaasi (NAHA) entsyymin aktiivisuutta. NAHA entsyymiä esiintyy sekä sienen rihmastossa että itiöissä ja sitä on havaittu aktiivisissa, lepotilassa ja elinkykynsä menettäneissä soluissa NAHA entsyymi voidaan määrittää fluorometrisesti Mycometer laitteistolla (Mycometer A/S, Tanska) Mycometerillä voidaan mitata homesienten kokonaisbiomassaa pinnoilta, materiaalinäytteistä, neste- ja ilmanäytteistä Mycometer A/S Anniina Salmela

5 Mikä on Mycometer? Entsymaattinen analyysimenetelmä homekasvuston havaitsemiseen ts. kokonaissienibiomassan määrittämiseen Mycometer testillä ei voida kuitenkaan määrittää näytteestä toksiineja tai erotella eri sienilajeja eikä voida määrittää bakteereja Mycometer mittaa NAHA -entsyymin määrää, jota löytyy kaikista homeista Mycometer A/S Anniina Salmela

6 Aineisto ja menetelmät Tutkimuksessa seurattiin P. brevicompactum sienen entsyymiaktiivisuuden muutosta 3 eri lämpötilassa huoneenlämpö (+20⁰C), jääkaappi (+7⁰C) ja pakastin (-36⁰C) lämpötilat. Yhden vuoden ajan Näytteet tutkittiin 0 kk, 1 kk, 4 kk, 6 kk ja 1 vuoden aikapisteissä Näytteet analysoitiin eri aikapisteissä kolmesta rinnakkaisesta näytteestä Tutkimuksessa käytettiin DG-18-alustalla kasvatettua P. brevicompactum kasvustoa Kasvuston pinnasta sieni-itiöt kerättiin 0,05% Tween80 liuokseen lasihelmimenetelmällä Anniina Salmela Anniina Salmela Anniina Salmela

7 Aineisto ja menetelmät Valmistettu suspensio annosteltiin 5ml erissä sekä steriileihin putkiin että suodatettiin polykarbonaattisuodattimien läpi Entsyymiaktiivisuus mitattiin Mycometer -laitteella Anniina Salmela Anniina Salmela Anniina Salmela Anniina Salmela

8 Entsyymiaktiivisuus suspensionäytteessä Tutkimuksessa havaittiin, että suspensiona säilytetyn näytteen entsyymiaktiivisuus kasvoi kun näytteitä säilytettiin huoneenlämmössä ja jääkaapissa entsyymiaktiivisuus laski kun näytteitä säilytettiin pakasteessa Muutokset suspensionäytteiden entsyymiaktiivisuudessa eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (p>0,05) +7 C -36 C +20 C Anniina Salmela

9 Entsyymiaktiivisuus suodatinnäytteessä Suodattimella säilytettyjen mikrobien entsyymiaktiivisuuden muutokset olivat suspensiossa säilytettyjen näytteiden muutoksia selkeämmät Suodattimella säilytetty näytteen entsyymiaktiivisuus laski 1. kuukauden aikana, jonka jälkeen entsyymiaktiivisuus säilyi tasaisena 5 kk pakasteessa ja jääkaapissa ennen kuin entsyymiaktiivisuus alkoi laskea Huoneenlämmössä säilytetyn näytteen entsyymiaktiivisuus laski koko vuoden ajan Pakasteessa säilytetyn suodatinnäytteen entsyymiaktiivisuudessa ei tapahtunut tilastollisesti merkitsevää muutosta. Sen sijaan muutokset huoneenlämmössä ja jääkaapissa säilytetyissä näytteissä olivat tilastollisesti merkitseviä (p<0,004) -36 C +7 C +20 C Anniina Salmela

10 Johtopäätökset Tutkimuksessa havaittiin, että mikrobibiomassan entsymaattinen määritys voidaan tehdä nestenäytteestä luotettavasti vielä vuoden säilömisen jälkeen, joskin lämpimässä säilytykseen liittyy mikrobikasvun riski. Suodatinnäyte tulisi säilyttää pakastimessa, mikäli näytettä joudutaan säilyttämään kuukausia. Lisätutkimukselle ja suuremmalle näyteotannalle on kuitenkin vielä tarvetta, jotta voidaan arvioida luotettavasti entsyymiaktiivisuuden säilymistä ja analyysimenetelmän toimivuutta. Tämä tutkimus ei kuitenkaan anna suoraan tietoa mikrobikontaminaation aktiivisuuden säilymisestä kenttäkohteissa. Anniina Salmela

11 Lisätietoja Anniina Salmela

Samankaltaiset tiedostot

Uusi vuosi, uudet kujeet - Kurkistus Aerobiologian laboratorion vuoteen 2016. Sirkku Häkkilä

Uusi vuosi, uudet kujeet - Kurkistus Aerobiologian laboratorion vuoteen 2016 Sirkku Häkkilä Asumisterveysasetus ja mikrobikasvun osoittaminen Terveyshaittaa selvitettäessä on mittauksessa ja näytteenotossa