Otoliittien merkinnästä alitsariinilla Pekka Keränen MMM, FK
Otoliitit (kuulokivet)( kalan päässä sisäkorvassa aragoniittia tai vateriittia (CaCO) tasapaino- ja kuuloaistin osia 3 paria: sagitta,, lapillus ja asteriscus sagitta ja lapillus kehittyvät jo alkiossa ikämääritys: sagitta tai lapillus (särkik.) otoliittimerkintä: sagitta tai lapillus
LAHNA vk 2005 ARS 20 ppm 2 h (ikä 0+) LAHNA vk 2005 CAL 200 ppm 4 h GFP sagitta ARS-merkki lapillus sagitta asteriscus ei merkkiä G
Miksi otoliittien merkintää? soveltuu vk-poikasille ja alkioille (mäti) voidaan käsitellä tuhansia kaloja kerralla merkintäkuolevuus vähäinen merkki säilyy kalan eliniän vk- ja mäti-istutusten istutusten tuloksellisuuden arviointi mahdollista
Otoliittien merkintämenetelmiä Kemialliset: fluoresoivat väriaineet SrCl 2 alitsariini (ARS, ALC) kalseiini kalseiinisininen tetrasykliinin johdan- naiset (TC, OTC) kylvetetään rehun mukana injektoidaan kalaan Fysikaaliset: lämpötilan säätely veden lämmitys veden jäähdytys valojakson säätely lyhennetty valo/pimeä- jakso (esim. 6 h/6 h) h radioisotooppimerkintä http://npafc npafc.taglab.org/voucherphoto-3.asp strontium ( 85 Sr)
Alitsariinipuna S (ARS) -väriaine 1,2-dihydroksiantrakinoninatriumsulfonaatti (C 14 H 7 O 7 NaS) kudosvärjäyksessä käytetty fluorokromi useita kaupallisia laatuja Sigma-Aldrich (sertifioitu, 25 g = n. 95 ) Standard Fluka (edullinen, 100 g = n. 50 ) Acros (sertifioitu, 25 g = n. 20-50 ) aineiden valmistuserien välillä voi olla eroja, mikä ilmenee värjäystehokkuuden vaihteluna (vakiopitoisuudella)
Merkin määritys stereofluoresenssi- mikroskooppi 100 W:n Hg-lamppu G- ja GFP-suodin edullisia vaihtoehto- ja UV-eksitaatiolle LED laser
Suotimet GFP-suotimella ARS- merkin väri eroaa otoliitin väristä (oranssi vs. vihreä) G-suotimella ARS- merkki näkyy kirkkaammin kuin GFP:llä (intensiteetti)
Merkinnän periaate perustuu kalan Ca- aineenvaihduntaan kylvetys väriaine- pitoisessa vedessä väriaine kulkeutuu kalan sisäkorvaan ja sitoutuu ohueksi kerrokseksi otoliitin ympärille otoliitin kasvaessa merkki jää pysyvästi otoliitin sisälle ARS
Vk:na merkitty Ø < 50 µm Ø ~ 50 µm Ø ~ 100 µm Ø ~ 300 µm
0+:na, 1-v:na ja 2-v:na merkitty NI ARS 0+ HN ARS 1 v. HN ARS 2 v.
Muiden luutumien värjäytyminen
Muiden luutumien värjäytyminen maxilla 0+ siika
Mätimerkintä mäti kylvetetään ilmastetussa ja kiertävässä väriaineliuoksessa (saavi/kaukalo/suppilo) pitoisuus 40-100 ppm, kylvetysaika 4-244 h mäti-väriliuossuhde < 1:5 väriaineliuos on kertakäyttöinen merkinnän onnistumisen todentaminen merkintätulos on hyvä, kun otoliitit fluoresoivat mätijyvän kuoren läpi
Siika spa (154 dºc) alkeisjyväsiä sisäkorva sagitta lapillus
SIIKA spa 22.10.2005 (~ 157 päiväastetta) ARS 50 ppm 20 min. värjäytyneitä alkeisjyväsiä (primordia) sagitta lapillus G GFP
Siika spa (204 dºc) otoliitit sagitta sisäkorva lapillus lapillus sagitta
Taimen spa (235 dºc) sagitta alkeisjyväsiä sisäkorva sagitta
MUIKKU PELED
Alitsariinikoodaus Merkintäkertoja (kylvetyksiä) toistamalla saadaan koodeja2 k -1 kpl (k=merkintäkertojen määrä; -1= nollakoodi) Koodien määrä eri kylvetyskertoja kohti saadaan binomikertoimesta n!/(k!(n-k)!) k)!) (n=koodien kokonaismäärä,, k=kylvetysten kylvetysten määrä) Koodin havaittavuus kokonaisessa otoliitissa edellyttää riittävän pitkää merkintäväliä sovellettu 2005-2006 2006 Inarijärven taimenkantojen ja eri-ikäisten ikäisten istukkaiden (1-3 3 v.) merkinnöissä
kanta/erä 1 kanta/erä 2 kanta/erä 3 spa spa + vk vk laitos 1 2 x spa 2 x spa 2 x vk laitos 2 + vk
Siika spa + vk (hiottu otoliitti) GFP G vk-merkki spa-merkki vk-merkki spa-merkki
TAIMEN (0+) kokonainen hiottu spa + vk -merkki spa vk 2 x vk -merkki vk 1 vk 2
NN 1v startti 500 dºc startti + 500 dºc startti + 800 dºc startti + 500 + 800 dºc
ARS-merkinnän edut ja ongelmat edullinen väriaine merkintä onnistuu pienillä pitoisuuksilla merkintäkuolleisuus alhainen (< 1 %) merkki havaittavissa vuosia (ainakin 7 v.) kylvetys vaatii vähän työvoimaa massamerkintä vie vähän aikaa merkkien määritys vaatii kalliin erikoisvälineistön otoliittien preparointi vie aikaa (koodimerkityt) autofluoresenssi ja valemerkit voivat aiheuttaa virhetulkintoja tulkinta vaatii jonkin verran asiantuntemusta ja tietoa merkinnöistä (koodaus)
Tuloksia, tekojärvien peled Lokka vk-istukkaat eivät ole tuottaneet kovin hyvin Porttipahta kesänvanhojen istukkaiden tuotto vk-istukkaita parempi 0+-poikanen vastaa 190 vk-poikasta (2-3 kasvukauden jälkeen) 100 % 90 % 80 % 70 % 60 % 50 % 40 % 30 % 20 % 10 % 0 % Porttipahta Lokka 2003 2004 2005 [n=269] [n=178] [n=461] [n=603] [n=23] [n=55] Vuosiluokka ARS (vk) ARS (0+) (vk) RV LT LT
Nellimin siiat 2004 (1+) Kivijärvi Pitkäjärvi Koddoohjärvi km-siika siika-aineiston aineiston perus- teella kesänvanha (0+) istukas vastaa 250 vk- istukasta (kahden kasvukauden jälkeen) 100 % 90 90 % 80 80 % 70 70 % 60 60 % 50 50 % 40 % 30 % 20 % 10 % 0 % Kivijärvi Pitkäjärvi Koddoohjärvi KM ARS LT LT ARS KM
Tuloksia, Ivalojoen mäti-istutukset istutukset