ORIGINS-Project Laboratory Manuals. free educational use as long as unmodified. version_fi. (c) the ORIGINS team

Samankaltaiset tiedostot
LABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI

FOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA

Kemiaa tekemällä välineitä ja työmenetelmiä

Geeli-elektroforeesi. Lähde:

LABORATORIOTYÖ: RESTRIKTIOENTSYYMIDIGESTIO

FOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA

α-amylaasi α-amylaasin eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Tärkkelys Oligosakkaridit Maltoosi + glukoosi

ENNAKKOTEHTÄVIÄ Mitkä ruoka-aineet sisältävät valkuaisaineita eli proteiineja? Missä yhteyksissä olet törmännyt sanaan proteiini tai valkuaisaine?

TEE-SE-ITSE-ELEKTROFOREESI

KUPARIASPIRINAATIN VALMISTUS

TÄS ON PROTSKUU! Missä yhteyksissä olet törmännyt sanaan proteiini tai valkuaisaine?

LÄÄKETEHTAAN UUMENISSA

KÄYTTÄJÄN OPAS. Yksityiskohtainen käyttöoppaasi. BYDUREON 2 mg injektiokuiva-aine ja liuotin depotsuspensiota varten

Mark Summary. Taitaja2015. Skill Number 604 Skill Laborantti. Competitor Name

Agaroosigeelielektroforeesi (AGE)

Tervetuloa. Kiitos, että valitsit Arlon. Pääset alkuun helposti.

QIAsymphony SP protokollatietolehtinen

Kondroitiinisulfaatti 2% ITSEKATETROINTI

TÄS ON PROTSKUU! PROTEIINIEN KEMIAA

ABT 2000kg Haarukkavaunun käyttöohje

Wine4U. Lisää elinikää viinillesi KÄYTTÖOHJE


Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria

ENERGIAA TÄRKKELYKSESTÄ! NELJÄ TUTKIMUSTA

Sunwind Cuisine 50cm pöytäliesi

Ajovalojen suuntauksen tarkastus, tarvittaessa

Rasvattoman maidon laktoosipitoisuuden määritys entsymaattisesti

Mittaustarkkuus ja likiarvolaskennan säännöt

PCR:n laadunvarmistus. Saija Hallanvuo Elintarvike- ja rehumikrobiologian tutkimusyksikkö/ Elintarvikemikrobiologiajaosto

HORNADY LOCK-N-LOAD SONIC CLEANER LOCK-N-LOAD MAGNUM SONIC CLEANER KÄYTTÖOHJE

KALIUMPERMANGANAATIN KULUTUS

Takaje vakuumilaitteen käyttö- ja huolto-ohje

Ovulaatiotesti. Lue ohjeet huolellisesti ennen käyttöä. SISÄLTÖ: Ovulaatiotestilaite, 7 testipuikkoa, käyttöohjeet

D: Digitaalikameran objektiivi E: Asetuspainike ja laukaisin F: USB-liitäntä


NuSeal 100 Kirurgisten saumojen tiivistäjä

YMPÄRISTÖKEMIAN LABORATORIOHARJOITUSTEN ANALYYSIOHJEET

SIPSEISSÄKÖ RASVAA? KOKEELLINEN TYÖ: PERUNALASTUJA VAI JUUSTONAKSUJA? Tämän työn tavoite on vertailla eri sipsilaatuja ja erottaa sipsistä rasva.

Liuenneen silikaatin spektrofotometrinen määritys

Kemian opetuksen keskus Helsingin yliopisto Veden kovuus Oppilaan ohje. Veden kovuus

Tutustu merkintöihin! Tärkeää tietoa siitä, miten varmistat pesu- ja puhdistusaineiden käytön turvallisuuden kotona

ENERGIAA TÄRKKELYKSESTÄ

TITRAUKSET, KALIBROINNIT, SÄHKÖNJOHTAVUUS, HAPPOJEN JA EMÄSTEN TARKASTELU

INSTANYL -VALMISTEEN KÄYTTÖOPAS Intranasaalinen fentanyylisumute

Vetokoukun johdinkimppu, 7 napainen

COLAJUOMAN HAPPAMUUS

dametric AGS-anturi HUOLTOKÄSIKIRJA AGS-XXX Service Manual FI.docx Lokakuu 12, 2010 / BL Sivu 1 (8)

MBT Sepsityper IVD Kit

SAIPPUALIUOKSEN SÄHKÖKEMIA JOHDANTO

Digitaalinen eropainekytkin DPS Käyttöohje

Vain koulutetun ja laillistetun laboratoriohenkilöstön ammattikäyttöön. Lue nämä ohjeet huolellisesti ennen kokeen käyttöä.

COLAJUOMAN HAPPAMUUS

LUMATE-tiedekerhokerta, suunnitelma AIHE: RIKOSPAIKKATUTKIMUS

Näiden ohjeiden avulla pystyt värjäämään lankoja kotikonstein ilman kemikaaleja.

P-Frami sopimusasiakkaan käyttöohje

HAPANTA HUNAJAA POHDITTAVAKSI ENNEN TYÖTÄ

SIPSEISSÄKÖ RASVAA? KOKEELLINEN TYÖ: PERUNALASTUJA VAI JUUSTONAKSUJA?

ASENNUSOHJE UPONOR UMPISÄILIÖ 3 M 3. Uponor umpisäiliö 3 m 3. Helppo käsitellä helppo asentaa.

ASENNUSOHJE KAMMIOEROTIN JEKA MOOTTORIOHJAIMELLE N

Mikrobilääkejäämien toteaminen maidosta Delvotest SP-NT - testillä

ABT PUNNITSEVA HAARUKKAVAUNU ECONOMY

BIOMUOVIA TÄRKKELYKSESTÄ

Ilmoittautuminen kansalliseen, SM-, AM- tai avoimeen kilpailuun


Installation instructions, accessories. Kattolaatikko. Volvo Car Corporation Gothenburg, Sweden. Ohje nro Versio Osa nro

Shandon Cytospin Collection Fluid Shandon Instant Eosin, Alcoholic Shandon Instant Eosin, Aqueous. Thermo ELECTRON CORPORATION

Proteiinikoon määritys (SDS-page)

PULLEAT VAAHTOKARKIT

Sähköpostiohjeet. Tehokas ja huoleton sähköposti

Viihdejärjestelmä, RSE, kaksi näyttöä, kahdella soittimella, (alnro )

KÄYTTÖOHJE HYDRAULIPURISTIN HP 95

Vain koulutetun ja laillistetun laboratoriohenkilöstön ammattikäyttöön. Ohjeet luettava huolellisesti ennen kokeen käyttöä.

SIVU 1. laittaa mikä tahansa geeli tai akryyli. TrendyNailWraps kynsikalvot ovat erittäin kestäviä ja saatavilla 50 erilaisena mallina.

1. Nimeä kuvaan nuolien osoittamat reitit/tavat, joiden kautta haitalliset aineet voivat päästä elimistöön.

WeAreMicrobiome tutkimus KOTIOHJEET. Luethan huolellisesti nämä ohjeet.

PAKKAUSSELOSTE. VPRIV 200 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten VPRIV 400 yksikköä infuusiokuiva-aine, liuosta varten velagluseraasi alfa

Hallituksen esitys työeläkejärjestelmää koskevan lainsäädännön muuttamiseksi ja eräiksi siihen liittyviksi laeiksi HE 16/2015

Käyttöoppaasi. AEG-ELECTROLUX 61400M-MNAE8

"Geenin toiminnan säätely" Moniste sivu 13

Altus RTS. 1 Tekniset tiedot: 2 Lähetin: Telis 1 Telis 4 Centralis RTS

RIKOSLABORATORIOSSA. KOHDERYHMÄ: Työ soveltuu yläkouluun ja lukioon. Lukion kurssit KE1, KE2, KE3, KE4, KE5, BI5

KÄYTTÖOHJEET Serie RV

Ohje hakulomakkeen täyttämiseen yliopistohaku.fi -palvelussa

1. Käytä aina silmä-, kuulo- ja hengityssuojaimia. Kiinnitä aina laitteeseen pölynimuri vähentääksesi koneen ulkopuolelle pääsevän pölyn määrää.

Sivu 2/6 4. Ojentajalihaksen venytys Nosta oikea käsi pystyyn pään viereen Koukista oikea käsi kyynärpäästä Ota vasemmalla kädellä kiinni oikean käden

Clostridium perfringens -bakteerin määrittäminen ja tunnistaminen. Pesäkelaskentatekniikka.

1. TrendyNailWraps kynsikalvot koko kynnelle

QIAamp DSP DNA FFPE Tissue Kit -käsikirja

QIAsymphony SP -protokollalomake

Trust PhotoCam 1300 TRUST PHOTOCAM Pika-asennusohje. Versio 1.0

Biokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016.

VEREN ph TAUSTAA. Veressä toimii 4 erilaista puskuria. Bikarbonaattipuskuri Fosfaattipuskuri Hemoglobiini Plasmaproteiinit

KLOORIJÄÄMÄT JUOMAVE- DESSÄ

BYETTA 5 mikrogrammaa injektioneste, liuos, esitäytetty injektiokynä (eksenatidi)

Käyttö-ja huolto-ohje Ajastin aikaa FIN

KUVANKÄSITTELY MS WORDISSA JA MS POWERPOINTISSA

1) Vaporisaattorin tammirunko 2) Etupaneeli 3) Boost-nappi 4) Tehonsäädin 5) Pesä 6) Pesän kansi 7) Boost-LED 8) Höyryn virtausaukko ja suodatin 9)

SISÄLLYSLUETTELO 14. KIERRÄTYSOHJE (WEEE)

ENERGIAA TÄRKKELYKSESTÄ! NELJÄ TUTKIMUSTA

PIKAOHJEET Käytettäväksi vain Sofia-analysaattorin kanssa.

Transkriptio:

ORIGINS-Project Laboratory Manuals free educational use as long as unmodified version_fi (c) the ORIGINS team

Säädettävien pipettien käyttö Pipetointivälineistöön kuuluu 4 säädettävää pipettiä, jotka on helppo tunnistaa värien avulla. Myös pipettien kärjet ovat värikoodattuja. Pidä pipetin kärki aina alaspäin. Pidä pipetistä kiinni kuvan osoittamalla tavalla. Pipetin kärkeä vaihdettaessa, nosta aina kärkilaatikon kantta itseesi päin minimoidaksesi kärkien kontaminaation. Älä paina liikaa uutta kärkeä asentaessasi. Huomioi pipetin min- ja maxtilavuus.ylempi luku ilmoittaa minimi- alempi maksimitilavuuden. Alarajalla valitse pienempi pipetti. Säädä tilavuus mustasta pyörästä. Huomaa, että keltaisia pipettejä on kaksi. Pipetti täytetään painamalla männästä ensimmäiseen pysäytyskohtaan asti. Kärki painetaan liuokseen ja mäntä vapautetaan. Haluttu määrä nestettä siirtyy pipettiin. Peukalon asento, kun pipetti on täynnä. Vältä kärjen laskemista liuokseen, kun tyhjennät pipetin. Ensimmäisen pysähdyksen kohdalla pipetti tyhjenee lähes täysin. Painettaessa mäntä pohjaan kaikki neste poistuu. Männästä painetaan toistamiseen alle 20!l:n tilavuuksilla adheesionesteen vuoksi

eristä genominen DNA Valmista 3 ml H2O tai 0,9% NaCl-liuos limakalvon solujen keräämistä varten. Pureskele poskien sisäpintoja ja purskuta liuosta suussasi ja sylkäise se takaisin putkiloon. Saadaksesi homogeenisen liuoksen sekoita solususpensiota 30 sekuntia vortexilla. Siirrä 1 ml liuosta Epiputkeen DNA:n eristämistä varten. Sentrifugoi 30 sekuntia ja dekantoi supernatantti ja lisää 30!l dd H2O Lisää Chelex(R)- beadsit poistaaksesi DNAasia aktivoivat metalli-ionit. Lisää 100!l Chelex(R) ja suspensoi pelletti uudelleen vortexilla. Solut hajotetaan lämpöshokilla kuumentamalla 10 minuuttia 99 C vesihauteessa tai metalliblokissa.. Sediment Chelex beads by short spinning for 30 sec Never miss balancing the rotor by using exact counterweight Poista supernatantti huolellisesti. Älä kanna Chelex beadseja. DNA on supernatantissa. Syväjäädytyssäilytystä varten siirrä Epiputkeen, tai käytä heti esimerkiksi templaattina PCRreaktiossa. Ota 2,5!l DNA + 22,5!l PCR-Mix tai H2O, jos käytät Amersham PCR-Beads

Agaroosigeelin valaminen Puskuriliuos (50x) Agarose, vaaka, alumiinifolio, keitinlasi 10ml / 400ml, 250ml:n mittalasi, 1ml:n säädettävä pipetti Käytettäessä 50X liuosta 300 ml:n elektroforeesipuskurin valmistukseen, säädä pipetti 3 ml:aan ja Siirrä 6 ml pipetoimalla kaksi kertaa 250 ml:n mittalasiin Lisää dd H2O 150ml:aan asti, siirrä keitinlasiin (400ml) ja lisää vielä 150ml, jolloin lasissa yhteensä 300ml Käytä alumiinifoliota apuna agarin punnituksessa. Tehtäessä 1% geeliä käytä 400 mg agaria. Muuten ohjeen mukaan Älä koskaan laita ylimääräistä agaria takaisin purkkiin. Käytä Erlenmeyerpulloa (100 ml) säilöäksesi 40 ml elektroforeesipuskuria. Lisää agarjauhe puskuriin. Älä sekoita! Merkitse nesteen pinnan taso tai punnitse vaa alla. Peitä pullo ylössuin asetetulla lasilla vähentääksesi haihtumista. Kuumenna mikrossa 400 watin teholla 3 minuuttia. Jotta geelistä saa täysin läpinäkyvää toimenpide voidaan toistaa. Tarkista tilavuus tai paino ja korvaa haihtunut neste. Kun liuos on jäähtynyt 50 C:een geeli voidaan valaa.

Amersham beads PCR Polymerase-Chain-Reaction Menetelmä 1 Vaihtoehto 2 Erä 1A Erä 2A 0,2 ml putket kansikuumentavalla PCR-laitteella Käytetään Amersham-Beads puskuri/polymeraasilla 2,5!l templaattia 1!l aluke eteenpäin 1!l aluke taaksepäin 20!l dd H2O = 2x Erä 1A Pidä putkia jäissä, Kunnes PCR alkaa. Menetelmä 2 0,5 ml putket Ei-kansikuumentava PCR-laite Vaihtoehto B Klassinen menetelmä Kaikki reagenssit lisätään erikseen Erä1B 2,5!l templaattia 4!l dntp-mix 13!l dd H2O 1!l Taq-polymeraasia 1!l aluke eteenpäin 1!l aluke taaksepäin Erä 2B = 2x erä1b Pidä putkia jäissä, kunnes PCR alkaa vaihtoehtoinen: Lisää puskuriksi Kresolrot 6M Glc:ssa Ohjelmoi PCR-laite ohjeen mukaan. 95 C 60s aluksi Kierrokset 1-35 XX C 30s pariutuminen 72 C 90s polymerisaatio 95 C 30s denaturaatio XX C 30s pariutuminen 72 C 3m polymerisaatio 95 C 5m lopuksi 4 C säilytys XX= alukkeen mukaan

DNA - Katkaisu Pipetti (20:200), kärki (keltainen) Eppendorf-putkia teline jäärasia ajastin Merkitse putket kaksoiskäsittelylle: E1, E2, E12, C, H20, Puskuri tai kertakäsittely: H2O, B(uskuri), E(ntsyymi) Ja negatiivinen C(ontrolli) Valmista H20 Eppendorf-putkessa katkaisureaktiota varten. Entsyymit jäissä valmiina toimintaan! Laita reaktioputket telineeseen, tarkkaile näytteitä, älä sekoita niitä! Säädä pipetti oikeaan tilavuuteen ja käytä sopivaa kärkeä (värikoodi). Tarkista pipetointilista ennen pipetointia. Käytä aina uutta kärkeä! Noudata Kuinka pipetoin onnistuneesti -ohjetta. Koske Epi-putkia vain kannen reunoista, jottei sisältö lämpene. ÄLÄ TEE kuten kuvassa! Pipetointi kanteen on hyväksytty toimenpide. Kerää pipetoidut nesteet Sentrifugoimalla lyhyesti. ÄLÄ UNOHDA tasapainottaa fuugia. Säädä inkubaattori 37 C ennen toimenpidettä. Inkuboi 30 min ja säilytä jäissä tai jäädytä -20 C pitempiaikaista säilytystä varten.

Agaroosigeelielektroforeesi Poista geelitarjotin ja laita se takaisin siten, että kampa on mustalla merkittyä negatiivista elektrodia kohden. Lisää elektroforeesipuskuria kammioon. Yleensä n. 260 ml riittää. Tarkista puskurin taso. Sen pitäisi olla n. 5 mm geelin pinnan yläpuolella. Kampa poistetaan varovaisesti vasta puskurin lisäämisen jälkeen. Käytä keltaisella merkittyä pipettiä (20 200) ja säädä se 30!l:aan näytteitä varten ja ohjeen mukaan markkerille. Pipetoi ohjeiden mukaan. Käytä aina uutta kärkeä jokaiselle näytteelle. Vältä reunakaistoja aina kun se on mahdollista. Aloita markkerilla toiselta kaistalta. Käytä keskikaistaa täydellä geelillä. Nyt lisää näytteet markkerin yläpuolisiin kaivoihin. Huom! Älä puhkaise kaivon pohjaa. Laita kammion kansi tiukasti kiinni ja pistä johdot kiinni voimalähteeseen. Huolehdi, että oikean väriset johdot menevät oikeaan paikkaan. Säädä jännitteeksi 120V. Käynnistä elektroforeesi virtakytkimestä. Katso, että kammiosta nousee kuplia ja että värit liikkuvat oikeaan suuntaan. Riippuen käytetystä värjäysmenetelmästä, näet erivärisiä nauhoja. Elektroforeesi kestää yleensä n. 30 min.