Ajankohtaista vertailulaboratoriosta Saija Hallanvuo Evira, Elintarvike- ja rehumikrobiologian laboratoriojaosto Ajankohtaista laboratoriorintamalla 27.9.2018
Ajankohtaiset asiat Laboratorioiden menestymisen seuranta vertailumittauksissa Suositeltavien menetelmien luettelo Elintarvikenäytteiden tutkimukset epidemiatilanteissa Bakteerikantojen lähettäminen Eviraan Ajankohtaista ISO standardeista ja NMKL menetelmistä Tulevaa koulutusta 2
Laboratorioiden menestymisen seuranta vertailumittauksissa Evira seuraa hyväksyttyjen laboratorioiden toimintaa osana EU:n valvonta-asetuksen mukaista vertailulaboratoriotoimintaa Evira on käynyt läpi hyväksyttyjen laboratorioiden toimittamat uusimmat koosteet laboratoriorekisterissä olevien menetelmien pätevyyskokeissa menestymisestä vuosina 2016 ja 2017 Tulokset olivat pääosin hyväksyttäviä ja osoittivat toiminnan luotettavuutta Poikkeavien tai puutteellisten tulosten syitä ja korjaavia toimenpiteitä käydään läpi yhteistyössä laboratorioiden kanssa Seuraava kysely toteutetaan keväällä 2019 3
Laboratorioiden menestymisen seuranta vertailumittauksissa EVIRA (Kaupallinen) vertailututkimusten järjestäjä Näyte Tulokset Raportti EVIRAN HYVÄKSYMÄ LABORATORIO Ottaa osaa vertailututkimukseen Tulosten koonti FINAS:lle (akkreditoinnin pätevyysalue) Tulosten koonti Eviralle (hyväksytyt menetelmät) Tulokset Tiedon/materiaalin siirtyminen Tiedonkulku tulosten ollessa riittämättömät tai epäselvät Toimenpiteet: vahva epäily laboratorion pätevyyden vaarantumisesta KANSALLINEN VERTAILULABORATORIO Laboratoriokohtainen tiedonkeruulomake perustuen hyväksyttyihin menetelmiin >lähetetään pyyntö vertailumittaustulosten toimittamisesta Tulosten tekninen tarkastus Alustavat lisätietokyselyt (puuttuvat tiedot, tekniset virheet lomakkeiden täytössä) Tulosten yhdistäminen Jakaminen asiantuntijatarkastukseen Tulosten hyväksyminen Lopulliset tulokset (sis. korjaavat toimenpiteet laboratorioista) EU-RL yhteyshenkilöt Laboratorioiden hyväksynnästä vastaava yksikkö: Päivittää laboratoriorekisterin (menetelmätiedot) 4
Suositeltavien menetelmien luettelo Kyselyjä tullut B. cereus ryhmän menetelmistä Tulkinta: NMKL menetelmissä pesäkkeiden laskeminen selektiiviagarilta, esim. MYP (Mossel) tai PEMBA -> varmistus veriagarilla voidaan todeta bakteerin mannitolin käyttö ja lesitinaasin tuotto lisäksi β-hemolyysin toteaminen veriagarilla NMKL menetelmässä selektiiviagarin hyödyntäminen ilmaistu epäselvästi NMKL 67:2010 menetelmä ilmoitetaan muunneltuna kun laskenta tapahtuu selektiiviagarilta 5
Elintarvikenäytteiden tutkimukset epidemiatilanteissa Ohje näytteiden tutkimisesta elintarvike- ja talousvesivälitteisessä epidemiassa (LAB 020) Elintarvikenäytteet lähetetään aina tutkittaviksi Eviran laboratorioon, kun taudinaiheuttaja on EHEC/STEC myös yksittäisissä tautitapauksissa näytteiden mukana tulee aina toimittaa laboratorioasetuksen (VNa 152/2015) 14 :n mukaiset näytteen taustatiedot eli Eviran lähetteen mukaiset tiedot Laajoissa epidemioissa, joissa aiheuttajana kampylobakteeri tai yersinia, näytteet voidaan tutkia Evirassa Sovittava tutkimuksista Eviran laboratorion kanssa etukäteen Epidemiaselvityksiin kuuluvat tutkimukset ovat maksuttomia Epidemianäytteiden tutkimuksissa eristetyt bakteerikannat lähetetään Eviraan mahdollisimman pian 6
STEC bakteerien toteaminen (CEN ISO/TS 13136:2012): Reaaliaikainen PCR Tulos: Ei todettu Näyte-DNA Viljely > Bakteerin eristys > alustavan tuloksen varmistus
STEC elintarvikeanalytiikan nykyinen työnjako Suomessa Reaaliaikainen PCR Tulos: Ei todettu Paikallislaboratoriot: MetropoliLab, Helsinki Scanlab, Oulu KVVY Porilab, Pori Viljelyvarmistus Evira, Mikrobiologian tutkimusyksikkö
STEC varmistus Evirassa stx -geeni positiivisten rikasteliemien lähettäminen Viranomais- ja omavalvontanäytteet (=kaikki näytteet) katsotaan elintarvikelain 40 :n mukaisiksi terveysvaaraan viittaaviksi tutkimustuloksiksi Näytteen mukana toimittaa Eviran lähetteen mukaiset tiedot (152/2015, 14 ) Laboratorioiden on toimitettava kaikki alustavat positiiviset STECrikastusliemet Eviraan. Kotimaisen hyväksytyn laboratorion velvollisuutena on huolehtia, että myös sen ulkomailta alihankittujen STEC-tutkimusten rikastusliemet toimitetaan Eviraan. Taustalla on laboratorioasetuksen 14 :n vaatimus laboratorioille toimittaa Eviraan terveysvaaraan viittaaviin tutkimustuloksiin liittyvät eristetyt mikrobikannat sekä elintarvikenäytteet. Toimitus 4 vrk kuluessa rikastuksen päättymisestä jotta viljelyvarmistus ei vaarannu Eviran näytelähete: www.evira.fi >> Tietoa Evirasta >> Lomakkeet ja ohjeet >> Elintarvikkeet >> Elintarvike-, lannoite- ja rehututkimus 9
Bakteerikantojen lähettäminen Eviraan Ohje laboratorioille bakteerikantojen ja elintarvikenäytteiden lähettämisestä Eviraan (LAB 009) Elintarvikkeista eristetyt Listeria monocytogenes-, EHEC/STEC-, kampylobakteeri- ja Yersinia kannat lähetetään aina Tuotantoympäristöstä eristetyt L. monocytogenes- kannat vain epidemiaepäilytilanteissa Bacillus cereus, koagulaasipositiiviset stafylokokit, Clostridium perfringens: yksittäiset ruokamyrkytystapaukset, joista ei tehdä epäilyilmoitusta kantoja ei lähetetä Bakteerikannat lähetetään mahdollisimman pian eristämisen jälkeen puhdasviljelminä 10
11
Bakteerikantojen lähettäminen Eviraan Aina kun epäillään ruokamyrkytysepidemian aiheuttajaksi > mitä tarkoittaa? THL: Milloin epidemiaepäily ilmoitetaan? Epäilyilmoitus tehdään aina kun kyseessä on laitoksessa esiintyvä epidemia (esim. koulu, päiväkoti, sairaala) on perusteltua aihetta epäillä kaupallista elintarviketta tartunnan lähteeksi on perusteltua aihetta epäillä ravintolassa saadun ruokamyrkytyksen johtuvan laajalle levinneestä raaka-aine-erästä tapauksia on enemmän kuin viisi kyseessä on poikkeuksellisen vakavan taudinkuvan aiheuttava tapaus esim. botulismi. Perhe-epidemioissa ilmoitus tehdään, jos on perusteltua aihetta epäillä kaupallista elintarviketta tartunnan lähteeksi. THL: https://thl.fi/fi/web/infektiotaudit/seuranta-ja-epidemiat/elintarvike-ja-vesivalitteiset-epidemiat/epidemianilmoittaminen 12
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista ja NMKL menetelmistä 13
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Salmonella ISO 6579-1: kansainvälinen rikastuslämpötilojen harmonointi > vertailututkimus: Rikastukset voidaan tehdä tulevaisuudessa 34-38 C:ssa ( kaikki voivat viitata ISO 6579-1 ) Inkubaattorin lämpötila-asetus joko 35 C ± 1 C tai 37 C ± 1 C muutososa valmisteilla > informoidaan lisää kun voimassa Ei käytännön muutostarvetta suomalaisille laboratorioille STEC standardin ISO/TS 13136:2012 uudistamisessa keskusteltua: Standardin jako kahtia: ISO 13136-1 (stx1,stx2 ja eae geenien skreenaminen elintarvikkeen rikastusliemestä ja STEC bakteerien viljelyvarmistus (kaikki STEC bakteerit) ja ISO 13136-2 (kantojen serotyypitys ja virulenssityypitys). Rikastusliemi vaihdetaan BPW liemeen Rikastuslämpötila mahdollisesti 37 C > 41,5 C Viljelyyn enemmän agarvaihtoehtoja Serotyypit O45 ja O121 (US lihavalmisteiden vaatimus) lisätään ja O104:H4 poistetaan 14
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Validointi ja verifiointi ISO 16140 standardisarja Standardin osa: Standardin vaikutusalue: 15
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Validointi ja verifiointi ISO 16140-3 halutaan koskevan vain uusia menetelmiä (ei taannehtivasti jo verifioituja menetelmiä) > keskustelu käynnissä ISO 16140 sarjan standardien käyttö vuokaavio käytön ohjaamisessa Ehdotettu muutosta siten että kaikki mikrobiologiset menetelmät (jopa standardimenetelmät) pitää olla ensin validoituja ISO 16140 sarjan tai ISO 17468:2016 mukaan ennen kuin ne voidaan verifioida Vaikutus viranomaisnäytteitä tutkiville laboratorioille: akkreditointivaatimus on kiristynyt (uusi EU valvonta-asetus) 15 lainsäädännön perusstandardimenetelmää validoitu, niiden ulkopuolella nykyinen verifiointitarve muuttuisi validoinniksi (esim. ruokamyrkytystutkimukset?) 16
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Elatusaineiden laadunvarmistus Standardissa annettuja vertailukantoja pyritään noudattamaan > perustelluista syistä voidaan poiketa (ei tee menetelmää muunnelluksi) Keittoerien testaus voidaan tehdä kvalitatiivisesti tai kvantitatiivisesti Keittoerätestauksen ympin määrä: Huomioitava standardin pitoisuusvaatimus 10^3 10^4 pmy semikvantitatiivinen menettely on mahdollista, jos laboratoriolla on kokemusta toistettavista tuloksista ja laadun seuraamisesta ko. menettelyllä Ei hyväksyttävää tehdä suoraan bakteeripuhdasviljelmästä (korkea pitoisuus) ISO 11133:2014 uudistustyö käynnistyy: Käytettävien vertailukantojen luettelointi ISO:n nettisivuille? REACH asetus asettaa rajoituksia joidenkin elatusaineiden (ainesosien) saatavuudelle > huomioitava menetelmästandardien uusimistyössä 17
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista ISO 6887 näytteenkäsittely: sarjan harmonointityö jatkuu ISO 6887-5 (milk and milk products) DIS-vaiheessa kuivien näytteiden esikäsittelystä halutaan tietoa lisättäväksi kaikkiin osiin Koagulaasipositiiviset stafylokokit (ISO 6888) Sovittiin kaikkien osien uudistuksen käynnistämisestä (kaksi vuotta) siten että osien sovellusalueet eivät muutu RPF- ja Paird-Parker-agarien käytön harmonointi ratkaistava E. coli määritys (ISO 16649, β-glucuronidase-positive E. coli ) Päätetty uudistaa standardisarja: osa 2 maljavalulle ja osa 4 pintalevitykselle Ryhmä ei ole pystynyt tuottamaan lisää tutkimustuloksia pintalevityksen puolesta, vaikka vetäjä totesi sen olevan parempi stressaantuneille soluille joita elintarvikenäytteissä useimmiten esiintyy 18
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista ISO 7218:2007 Mikrobiologian perusstandardi uudistamistyö on jatkunut taustatyönä jo vuosia. Vuodelle 2019 kaavaillaan virallista käynnistämistä B. cereus ryhmän bakteerien määritys (ISO 7932:2004 uusiminen) Suunnitteilla korvata MYP- agar kromogeenisella Bacara-agarilla > vain yksi agar (B. cytotoxicus kasvu?) Liitteet: Patogeenisuustestit cytk-1 ja cytk-2 geenien osalta, Patogeenisuustesti ces geenille, Liikkuvuustesti B. anthracis bakteerin poissulkemiseksi Liite F: B. thuringensis -bakteerin tunnistaminen mikroskopoinnilla Perusosan standardiehdotus (NWIP) helmikuuhun 2019 mennessä 19
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Sulfiittia pelkistävät klostridit ja C. perfringens ISO 15213 uusiminen Yhdistetään ISO 15213:2003 (Clostridium spp.) ja ISO 7937:2004 kolmiosaiseksi standardiksi (osat sulf pelk kl, C. perfringens määritys ja C. perfringens toteaminen) Tehty vertailuja elatusaineista (liemet IMM ja RPM, sekä maljat TSC, LENA, sekä mm. rauta-sulfiittiagaria ISA) Suunnitteilla ISO 17648:n mukainen, 10 laboratorion multilaboratory trial esikoe vuonna 2019 20
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Hiivat ja homeet (ISO 21527-1 ja 2 (2008) uusiminen, osien yhdistäminen) Tarkoitus on tehdä yleinen menetelmä DRBC agarille (pintalevitys, elintarvikkeen aw >0,95) Erilliset liitteet tuotteille joiden aw 0,76-0,95 (DG18 agarin käyttö) ja tuotteille joiden aw on 0,60-0,75 (kahden agarin esim. DG18 ja MY50G, Malt Yeast Extract 50% Glucose Agar käyttö) Jälkimmäinen osa suunniteltu soveltumaan myös osmofiilisten hiivojen toteamiseen (laimennosliuoksen vaihto > 0,1% peptoni > 20% glukoosi) Korostetaan että DRBC ja DG 18 eivät sovellu kserofiilisille hiivoille ja homeille, joiden aw vaatimus on yleensä <0,75 Ryhmän työ ollut hidasta > luonnosversiota odotetaan 4/2019 mennessä 21
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista Uusi standardiehdotus: Itiöiden lukumäärän määritys Loiset - Uudet standardiehdotukset etenevät Detection of Anisakidae larvae in fish and fishery products, osat 1 ja 2 Cyclospora cayetanensis Shigella ISO 21567 uusiminen käynnistetty Rikastusliemen koostumuksen ja maljojen testausta Enteroinvasiivinen E. coli (EIEC) mukaan standardin sovellusalueeseen Shigella ja EIEC kuuluvat kokogenomisekvensoinnin perusteella samaan lajiin ja niillä on yhteisiä seroryhmiä 22
Uutisia elintarvikemikrobiologian ISO standardeista ISO 18593:2018 julkaistu (Microbiology of the food chain -- Horizontal methods for surface sampling) Ei sisällä alkutuotannon näytteitä (ISO 13307), ruhoja (ISO 17604) eikä noroviruksia varten tehtävää näytteenottoa (ISO 15216-1) Standardin EN ISO 20976 laatiminen kasvukokeiden suorittamiselle Part 1: Challenge tests to study the growth potential, lag time and the maximum growth rate Part 2: Challenge tests to study the inactivation Determination and use of cardinal values / parameters for inactivation > omiksi standardeikseen koska voidaan hyödyntää muissakin menetelmissä Uusi standardiehdotus: ISO 23418 kokogenomisekvensoinnista luonnosteilla Standardin sovellusalueena mm. laboratoriossa työskentely (sekvensointi) ja bioinformatiikan työvuot (niiden kehittäjät ja käyttäjät) 23
Uutisia NMKL:n mikrobiologian työryhmästä NMKL ohje PCR:n laadunvarmistuksesta Koulutusta/workshop aiheesta suunnitteilla kun ohje on valmis Uusi ohje: näytteiden yhdistäminen mikrobiologista tutkimusta varten Opastus yhdistämiseen Kuinka verifioidaan > ei toistaiseksi yksimielisyyttä Uusiminen käynnissä: NMKL 151 Shigella viljely, NMKL 164 E. coli O157, NMKL 117 Y. enterocolitica, NMKL 193 luonnos Y. pseudotuberculosis NMKL 140, 2007, maitohappobakteerit: uudistamista käynnistellään SE johdolla Varmistustestaus pakolliseksi Menetelmien harmonoimista vastaavan ISO menetelmän kanssa käynnistellään NMKL 119:2007 Lämpökestoiset kampylobakteerit NMKL 136:2010 Listeria monocytogenens (jako kahtia?) NMKL 125:2005 Lämpökestoiset koliformit ja E. coli NMKL 67: Bacillus cereus ryhmän bakteerit? 24
Elintarvikemikrobiologian ISO ja NMKL työ Suomen standardointiliitto SFS > TR 3 Mikrobiologiset menetelmät (vastuukomiteat CEN/TC 275/WG 6, ISO/TC 34/SC 9) Mikrobiologinen jaosto: NMKL työ, laboratorioasiat Jäsenet: Evira: Saija Hallanvuo, pj., Marjaana Hakkinen, Satu Hakola, Annika Pihlajasaari, Maria Simola, Maria Nummela, Annukka Markkula, Anniina Jaakkonen Tullilaboratorio: Elina Vatunen Helsingin yliopisto: Elina Säde, Leena Maunula Helena Wikman (Metropolilab Oy), Seija Pihlajaviita (Atria), Anu Surakka (Valio), Eija Kolmonen (Arla), Anna-Mari Alanen (KVVY), Eija Mäkinen, siht. (SFS), Tuula Pirhonen Haluatko mukaan vaikuttamaan menetelmien sisältöön? Ota yhteyttä Saija Hallanvuohon 25
Tulevaa koulutusta Suunnitteilla mikrobiologiseen mittausepävarmuuteen liittyvää koulutusta vuonna 2019 26
Yhteyshenkilöt Elintarvikkeet Satu Hakola: Salmonella; stafylokokit ja Bacillus cereus enterotoksiinit Maria Aarnio: Bacillus cereus ryhmän bakteerit Marjaana Hakkinen: Kampylobakteerit Saija Hallanvuo: E. coli mukaan lukien STEC/VTEC-bakteerit; Yersinia-bakteerit Anniina Jaakkonen: STEC/VTEC-bakteerit Maria Simola (o.s. Rönnqvist): Listeriat Suvi Nykäsenoja: Antibioottiresistenssi Katariina Pekkanen: Antibioottijäämät elintarvikkeissa (mikrobiologiset menetelmät) Rehut Satu Hakola: Salmonella Maria Aarnio: Eläinperäiset proteiinit rehuissa Eläimet ja alkutuotanto Sirpa Heinikainen ja Tarja Pohjanvirta: E. coli, myös VTEC/STEC-bakteerit Henry Kuronen: Salmonella; salmonellojen serotyypitys (myös elintarvikenäytteistä) 27