Kromosomit. 1. Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä. 2. Drosophilan sylkirauhaskromosomi. monisteen sivulta 32-

Transkriptio

1 Kromosomit 1. Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä 2. Drosophilan sylkirauhaskromosomi monisteen sivulta 32-

2

3

4 Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä 1) Havainnollistetaan menetelmää, jolla jo sata vuotta sitten ruvettiin selvittämään periytymisen aineellista perustaa 2) Havainnollistetaan sitä, kuinka pysäytyskuvista voidaan ahkeralla toistamisella ja päättelyllä kehittää dynaamisen prosessin malli 3) Havainnollistetaan sitäkin, kuinka preparaatin teko ja muut tekniset konstit ovat tosin tärkeitä, mutta tosi työ alkaa vasta sen jälkeen 4) Mitoosipreparaatit ovat täysin ajankohtaisia vielä tänäänkin! Kromosomien ja kromosomistojen tutkiminen Kts. perusteiden luentojen aneuploidiat

5 Ihmisen mitoosikromosomeja tutkitaan valkosoluviljelmästä, joka pysäytetään myrkyllä sopivaan vaiheeseen

6 Kuvat on leikattu ja liimattu oikeaan järjestykseen

7 Kromosomit kurssityönä 1. Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä (sivu 32) 2. Drosophilan sylkirauhaskromosomi (sivu 36)

8

9

10

11 CELL CD 1407

12 1) Leikkaa juuresta vedessä petrimaljalla ~1 cm kärkiä 2) Tiputa kärkiä fiksatiiviin : aseto-etanoli 1:3 eli 1 osa väkevää etikkahappoa (syövyttävää!) ja kolme osaa etanolia (vaaratonta!) Assistentit näyttävät, miten vaarallisia aineita pipetoidaan 3) Vaihda fiksatiivia pasteur-pipetillä kerran epparissa 4) Vaihda fiksatiivi värjäysliuokseksi pasteur-pipetillä. Värjäysliuos on aseto-orseiini (sivu 35). Värjäys 60ºC vesihauteessa tunnin ajan 5) Värin pesu 45% etikkahapolla, useita kertoja huuhtomalla 6) Liiskaa kärkiä 45% etikkahappopisarassa puhtaalle objektilasille peitinlasin alla

13 Loppuvaihe: Tiivistä peitinlasin reunat kynsilakalla, niin näyte pysyy kosteana niin kauan kuin tarvitaan mikroskopointiin Mikroskopoi hartaasti, jotta näkisitkin jotain. Tämä vaihe on tärkein ja opettavaisin Mikroskoopista voi erikoisen hyvin ottaa kuvia pienilinssisillä kameroilla, erityisesti kännykkäkameralla. Valotysaika on kuitenkin aika pitkä, joten vapinaa pitäisi jotenkin torjua Saliin viritellään myös kamerasysteemi

14

15

16

17 Kromosomit kurssityönä 1. Mitoosipreparaatti sipulin juurenkärjestä (sivu 32) 2. Drosophilan sylkirauhaskromosomi (sivu 36)

18

19

20 Kromosomit ykkönen (kytkentäkartta) ja kolmonen (sylkirauhaskuva) voidaan yhdistää: Abstraktin kytkentäkartan merkkigeenit on sijoitettu fyysisen sylkirauhaskromosomin juoviin niin tarkoin kuin on kulloinkin voitu. Sijoitusmenetelmä perustui siihen, että kun fyysinen muutos nähdään, kytkentäkarttamuutokset voidaan korreloida siihen. Nykyisin tehdään näin: kun geenin emässekvenssi tunnetaan, vastaava sekvenssi voidaan paikantaa sylkkäriin in situ -hybridisaation avulla.

21 Kytkentäkartta ja jättiläiskromosomin kuva linkattuna 1934

22 dissonance-geenin DNA:n in situ -hybridisointi D. a. americanassa Seliina Päällysahon väitöskirjasta

23 dissonance-geenin DNA:n in situ -hybridisointi D. a. americanassa Seliina Päällysahon väitöskirjasta

24 paralytic-geenin DNA:n in situ -hybridisointi D. a. americanassa Seliina Päällysahon väitöskirjasta

25 Engrailed geenituotteen vaikutustapa Engrailed proteiini sitoutuu lukuisiin erityisiin sylkirauhaskromosomin kohtiin, toisin sanoen useiden geenien säätelyalueille (punaväri = engrailed-vasta-aine). Nimeltä tunnetaan 86 target-geeniä, siiven, hengitysputkien, lihasten, hermoston ja silmän kehitysketjuista [Solano et al., Development Apr 2003]

26 CELL 1194 Extra sex combs on samanlainen paikkatietogeeni. Sen vioittumisen seuraus on kuvassa A, ja sitoutumispaikat genomissa kuvassa B

27

28 1) Ota pullosta mahdollisimman iso 3. vaiheen toukka 2) Pidä toukkaa Drosophila-ringerissä (0.67 % NaCl?) 3) Tartu pinseteillä peräpäähän ja toisilla etupäähän ja revi ne erilleen. Sisälmykset pulpahtavat esille. Tutki niitä. etupää peräpää sylkirauhanen

29 3) Siirrä sylkirauhaset 70% etikkahapossa olevaan astetoorseiiniväriin. 4) Vaihda 10 minuutin päästä uuteen väripisaraan toiseksi kymmeneksi minuutiksi. Väri ei saa välillä kuivua! 5) Siirrä sylkkärit puhtaaseen 45% etikkahappopisaraan, sitten seuraavaan, ja 6) Liiskaa. Hinkkaamatta, siis yhdensuuntainen puristus eikä sivuille luiskahtelua. Kutikulaa ja hengitysputkien osia pitäisi välttää, koska ne estävät liiskautumisen 7) Lakkaa preparaatti ja rupea ihailemaan näkymiä

30

31

32

33