Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria
|
|
- Taisto Haapasalo
- 6 vuotta sitten
- Katselukertoja:
Transkriptio
1 2 3 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria P Biokemian menetelmät I BMTK / Juha Kerätär Luennon aiheet ja tavoitteet Pipetit ja pipetointi Sentrifugit ja sentrifugointi Spektrofotometria ja sen perussovellukset Opiskelija tietää ja osaa kertoa, mihin ja miten käytetään pipettiä, sentrifugia ja spektrofotometriä. Opiskelija osaa turvallisesti käyttää sentrifugia. Opiskelija osaa laskea spektrofotometrilla määritettyjen näytteiden pitoisuuksia. Biokemian laboratorion laitteet Keskustele parisi kanssa tai pienessä ryhmässä: Olet hankkinut kotiisi uuden kodinkoneen. Miten toimit ottaessasi sen käyttöön? Biokemian laboratorion laitteet ovat tyypillisesti kalliita erikoislaitteita. Miten käytät niitä turvallisesti, ja niiden käyttötarkoituksen mukaisesti? 1
2 4 5 6 Laitteiden käyttö Tutustu käyttöohjeisiin! Jos olet epävarma, kysy neuvoa. Kursseilla kurssiassistenteilta tai teknikoilta, muussa laboratoriotyössä laitteen vastuuhenkilöltä tai sitä aiemmin käyttäneeltä. Varaa laite käyttöösi, jos sille on varausjärjestelmä. Täytä käyttöpäiväkirja, jos sellainen on. Ilmoita laitteessa ilmenneestä viasta heti! Sulje laitteet käytön jälkeen. Käyttöikä (esim. UV-lampun kuluminen) Tapaturmat ja tulipalot (esim. kuumenevat osat) Pipetointi Nesteen mittaamista ja siirtämistä. Valitse pipetti käyttötarkoituksen mukaan (Pasteur-pipetti, lasinen tai muovinen mittapipetti, automaattipipetti). Tarkkuus Tilavuus Näytteen pitää olla sula ja homogeeninen. Sekoita näyte ennen pipetointia, ja putki johon pipetoit sen jälkeen. Älä pipetoi suoraan varastopullosta. Automaattipipetti Biokemistin tärkeimpiä työkaluja. Käytetään kertakäyttöisiä kärkiä vaihda kärki joka pipetoinnin jälkeen! Usein sarja erikokoisia pipettejä, joilla voidaan pipetoida tietty tilavuusalue (esim. 0,5 µl 5 ml). Pipetointi automaattipipetillä Säädä pipettiin pipetoitava tilavuus. Pipettiin merkittyä säätöaluetta ei saa alittaa tai ylittää! Kiinnitä puhdas (steriili?) kärki. Pipetointi: Paina pipetin painike ensimmäiseen vasteeseen (0 1). Vie kärki juuri ja juuri nestepinnan alle. Jos upotat kärjen syvälle nesteeseen, pipetoituva tilavuus voi olla epätarkka etenkin viskooseilla nesteillä. Vapauta painike rauhallisesti (1 0), jolloin neste siirtyy kärkeen. Kärjen ulkopinnalle mahdollisesti jääneen nesteen voi poistaa koskettamalla kärjellä putken reunaa. Tyhjennä pipetti painamalla ensin painike ensin ensimmäiseen vasteeseen (0 1), sitten pohjaan (1 2). Poista kärki nesteestä ja vapauta painike. 2
3 7 8 9 Pipetin säilytys ja huolto Säilytä pipetti aina pystyasennossa pipetille tarkoitetussa telineessä. Poista aina käytetty kärki kärkiroskikseen käytön jälkeen! Älä jätä käytettyä kärkeä kiinni pipettiin. Jos pipetin kärkiosaan menee pipetoitavaa nestettä: Poista kärjen suojana oleva filtteri (jos on). Puhdista kärkiosa imupaperilla tai ohuella pumpulipuikolla. Myös 70% etanolia voi käyttää, anna kuivua. Jos pipetissä käytetään filtteriä, vaihda lopuksi puhdas filtteri. Pipetin säännöllinen kalibrointi! Mieti työergonomiaa: esimerkiksi tue käsi pöytään pipetoidessasi. (Sartoriuksen video ergonomiasta pipetoidessa: Sentrifugointi Sentrifugointi perustuu näytepartikkelien (hiukkasten) liikkuvuuteen nesteessä. Tämä riippuu: Käytetystä voimasta (esimerkiksi: maan vetovoima) Hiukkasen ja nesteen tiheyserosta Hiukkasen koosta ja muodosta (kitka) Nesteen viskositeetista (kitka) Solujen tai soluorganellien sedimentaatio liuoksessa pelkän painovoiman avulla on liian hidasta sentrifugin käyttö. Tyypillisiä sentrifugoinnin sovelluksia: Saostetun molekyylin (esim. DNA, RNA, proteiinit) erottaminen liuoksesta. Saostuman poistaminen. Bakteerien tai solujen kerääminen kasvatusliuoksesta. Soluorganellien erottelu hajotetuista soluista. Spinnaus, liuoksen kerääminen putken pohjalle nopealla sentrifugoinnilla. Sentrifugoinnin jälkeen: Sakka putken pohjalla = pelletti Liuosfaasi = supernatantti Sentrifugointi Harjoituslasku: Pesukoneen rummun säde on 25 cm. Kun sen linkousohjelmilla pyörimisnopeudet ovat 800, 1000 ja 1200 rpm, mitkä ovat syntyvät g-voimat? RCF = 1, ( ) 2 = 178, 88 g 179 g Voimat ovat 179 x g, 280 x g ja 402 x g. Mitä huomaat? Sedimentaatio sentrifugissa saadaan aikaan pyörittämällä näytettä suurella nopeudella. Syntyvä voima riippuu sentrifugin roottorin säteestä r (mm) ja pyörimisnopeudesta rpm (revolutionsper minute). Voima (RCF, relative centrifugalforce, garvo ) voidaan laskea yhtälöstä: RCF = 1, 118r( rpm 1000 )2 Jos tiedossa on haluttu g-arvo ja roottorin säde, voidaan laskea myös tarvittava pyörimisnopeus: rpm = 945, 7 RCF r 3
4 Sentrifugointi Työohjeissa sentrifugointi-työvaiheen kohdalla ilmoitetaan aina g-arvo. Moderneissa sentrifugeissa laite laskee automaattisesti tarvittavan kierrosnopeuden, kun siihen syöttää halutun g-arvon (kiinteäroottoriset sentrifugit). Irtoroottorisissa sentrifugeissa laitteeseen voi joutua syöttämään käytetyn roottorin koodin tai tyypin, jolloin laite laskee tarvittavan kierrosnopeuden. Vanhoissa sentrifugeissa ei välttämättä ole kuin rpm-säätö tarvittavan g-arvon voi joutua laskemaan käytetyn roottorin tietojen perusteella kuten edellä. Käytännössä tarjolla on tällöin lähes aina taulukko tai nomogrammi tarvittavan kierrosnopeuden arvioimiseen. Sentrifugoinnin sovelluksia Sedimentaatiosentrifugointi Yleisin laboratoriossa tehtävä sentrifugointi. Suspensiossa olevan kiinteän faasin erottaminen liuosfaasista, tai kahden tiheydeltään erilaisen liuosfaasin erottaminen toisistaan. Esimerkkejä: Bakteerien kerääminen kasvatusliuoksesta. DNA-, RNA- tai proteiinisakan kerääminen liuoksesta. Fenoli-kloroformi- ja vesifaasien erottaminen DNA:n puhdistuksessa. Differentiaalisentrifugointi Sarja sentrifugaalivoimaltaan tai kestoltaan poikkeavia sentrifugointivaiheita, joista kussakin suspensiosta erotetaan joku tai jotkin sen osista. Esimerkki: soluorganellien eristäminen kudoksesta. (Wikipedia 2009) 4
5 Sentrifugoinnin sovelluksia (Sigma-Aldrich) Gradienttisentrifugointi eli tiheyserottelusentrifugointi Putken pohjaa kohti kasvava, jatkuva- tai epäjatkuva tiheys- tai konsentraatiogradientti inertistä, vesiliukoisesta aineesta (cesiumkloridi, sakkaroosi, ficoll- tai percollgradientti). Erottelee seoksen partikkelit niiden tiheyden perusteella. Esimerkkejä: Erittäin puhtaiden mitokondrioiden tai peroksisomien eristäminen. Voidaan jakaa edelleen isopykniseen ja vyöhykesentrifugointiin: Isopykninen sentrifugointi: Eroteltavissa molekyyleissä erilainen tiheys, mutta samanlainen molekyylipaino. Korkea ajonopeus, pitkä ajoaika. Vyöhykesentrifugointi (rate-zonal centrifugation): Eroteltavissa molekyyleissä samanlainen tiheys, mutta erilainen molekyylipaino. Matalampi ajonopeus, lyhyempi ajoaika. Sentrifugointi ja roottorit Roottorien materiaali vaihtelee käyttötarkoituksen mukaan: Matala nopeus: alumiini tai teräs Keskinopeus: alumiini, titaani tai hiilikuitu Suuret nopeudet: titaani Materiaalin ominaisuudet vaihtelevat: Alumiini: altis metallin väsymiselle suurissa g-voimissa, sekä kemialliselle korroosiolle (pintanaarmut!). Titaani: kestää paremmin suuria g-voimia. Raskas ja kallis. Hiilikuitu: kevyt, nopeuttaa roottorin kiihdyttämistä ja jarruttamista ja siten lyhentää ajoaikaa. Kestää korroosiota. Roottorilla aina maksimi-ajonopeus. Voi muuttua roottorin käytön ja kulumisen seurauksena! Kulmaroottori (fixed angle rotor) (Beckman JA-10 alumiiniroottori) sakka Putket roottorissa vinossa kulmassa. Sedimentoitumisaika lyhyt. Sakka kerääntyy putken uloimpaan kohtaan helppo kerätä talteen. Suurien tilavuuksien sentrifugointi nopeaa. Hyvin yleinen roottorityyppi biokemian laboratoriossa: kiinteäroottoriset spinnerit, pienet pöytäfuugit, sekä suuremmat irtoroottoriset sentrifugit. Yleisiä roottorityyppejä BMTK:n kursseilla: SS-34 (r = 107 mm, 8 x 50 ml putkia tai 8 x 15 ml + adapterit); SLA-1500 (r = 145 mm, 6 x 250 ml) Huomatkaa: roottorin r erilainen eri kohdissa putkea! Esimerkiksi kuvassa: r min = 38 mm, r av = 98 mm, r max = 159 mm näytteeseen kohdistuva voima muuttuu! 5
6 Pysäytetyssä roottorissa putkikotelot pystysuorassa, pyörivässä putket kääntyvät vaakasuoraan. Sedimentaatiomatkana koko putken pituus maksimaalinen erottelukyky, mutta pitkä ajoaika. Sakka kerääntyy näyteputken pohjalle. Yleinen sovellus: bakteeriviljelmien kerääminen kasvatuksen jälkeen kasvatusliuoksesta. Putkikotelot usein irrallisia kaikkien koteloiden tai korien oltava ajon aikana kuitenkin paikallaan! Roottori rasittuu ajon aikana tyhjien paikkojen vuoksi. Tarkista aina, että putkikotelo pystyy kääntymään kokonaan, eikä esimerkiksi näyteputki ota kiinni roottoriin! Kääntyväputkiroottori (swingbucket) Vertikaaliputkiroottori Putket pystysuorassa roottorissa. Näytemolekyyleillä lyhin mahdollinen kulkeutumismatka silti nopein ajoaika ja paras resoluutio. Ei kuitenkaan sovellu näytteiden keräämiseen, pelletti leviää koko seinämän mitalle. Tyypillinen sovellus: gradienttisentrifugointi ultrasentrifugissa. Sentrifugi ja roottori Mini low speed spinneri Sentrifugityyppejä Max x Max Näytetilavuus g rpm x 1,5 ml 6 x 2,0 ml Mihin käytetään? Liuoksen kerääminen näyteputken pohjalle, spinnaus Kiinteä kulmaroottori Nopea käyttää Mikro high speed Kiinteä kulmaroottori Joissain malleissa jäähdytys Laboratorion peruslaite x 1,5 ml Sedimentaatio 18 x 2,0 ml Näytteen konsentrointi spinnaus Nopea käyttää, saavuttaa maksiminopeuden noin kymmenessä sekunnissa. Laboratorion peruslaite 6
7 Sentrifugi ja roottori Max x Max g rpm Näytetilavuus Mihin käytetään? Pöytä low speed Kiinteä kääntyväputkinen roottori Usein myös mahdollisuus jäähdyttää x 4 x 50 ml 4 x 8 x 15 ml 4 x 250 ml Suspensiona kasvatettujen solujen, hiivojen ja bakteerien erottaminen kasvatusliuoksesta. Konsentrointi Nopea käyttää Tiedekunnassa useita eri malleja Lattia high speed Erikokoisia kulmaroottoreita Aina jäähdyttävä Laitehuoneessa! Roottorin mukaan, esim: SS x 50 ml SLA x 250 ml Bakteerisolujen erottaminen Saostuman erottaminen DNApuhdistuksesta Soluorganellien fraktiointi Solujäänteiden erotus homogenaatista Sentrifugi ja Max x Max roottori g rpm Ultrasentrifugi high speed Roottorikammiossa tyhjiö Kiihdytys ja jarrutus tarkkaan säädeltävissä Erilaisia vaihdettavia roottoreita Näytetilavuus Roottorin mukaan, esim: Ti 45 6 x 94 ml Ti 70 8 x 39 ml Mihin käytetään? Soluorganellien fraktiointi (kalvorakenteet, mitokondriot, peroksisomit, jne.) Lipoproteiinien eristys Proteiinin molekyylipainon määritys Monia preparatiiviisia ja analyyttisia käyttötarkoituksia! Sentrifugointiputket Laboratorion mini- ja mikrosentrifugeihin käyvät 1,5 2 ml mikroputket, epparit. Isompiin pöytäsentrifugeihin mahtuvat myös 15 ml ja 50 ml falcon-putket, joihinkin myös esimerkiksi erikokoiset pullot. Lattiasentrifugin SS-34 roottoriin tarvitsee SS-34 putket, tai muoviadaptereihin laitetut corexlasiputket. SLA-1500 roottoriin 250 ml sentrifugipullot. Tavallinen lasiputki ei kestä sentrifugointia. Aina sentrifugoinnin kestävä lasimateriaali (esim. corex). Ultrasentrifugiin on omat putkensa erilaisiin käyttötarkoituksiin. 7
8 Sentrifugointi käytännössä DNA-sakan erotus: korkean nopeuden pöytäsentrifuugi, (suurella volyymillä lattiasentrifugi irtoroottorilla). Työohjeessa ilmoitetaan sentrifugoinnista: sentrifugaalivoima (RCF, g-arvo) sentrifugointiaika lämpötila (tyypillisesti RT tai +4 C) Sentrifugi, näyteputki (ja roottori) valitaan näytetilavuuden ja vaadittavan sentrifugaalivoiman mukaan. Millaista sentrifugia käyttäisit seuraavien näytteiden kohdalla? DNA-sakan erotus 1 ml:sta nestettä, x g Bakteerien erotus 1000 ml:sta kasvatusmediaa, 3000 x g Sentrifugin turvallinen käyttö Keskustelu parin kanssa tai pienessä ryhmässä: Mitä tapahtuu, jos pesukone on epätasapainossa? Mitä luulet tapahtuvan, jos roottori, jossa sentrifugaalivoima on x g, on epätasapainossa ajon aikana? Kun ultrasentrifugiin laitetaan roottori, jota valmistaja ei ole hyväksynyt käytettäväksi tässä ultrasentrifugissa: ty/alerts/ultra_explosion.html Bakteerien erotus: matalan nopeuden pöytä- tai lattiasentrifugi. Sentrifugointi käytännössä Varmista että käytetyt näyteputket kestävät käytetyt g-arvot. Jokaisella sentrifugiputkella on aina oltava roottorissa samanpainoinen vastinputki. Pienissä pöytäsentrifugeissa: vastinputki toinen näyteputki tai vastapainoputki, jossa nestettä noin saman verran. Irtoroottoreita käyttävissa isoissa high speed sentrifugeissa, esimerkiksi SS-34- ja SLA-1500-roottorit: putki ja sen vastinputki tasapainotettava vaa alla! Muista tehdä tasapainotus mahdollisen korkin tai adapterin kanssa. Vastinputken nesteen tulee olla tiheydeltään samanlaista näyteputken kanssa. Älä ylitäytä etenkään kulmaroottoreissa käytettävia avoimia putkia! Väärin tasapainotettu putki voi rikkoa roottorin tai sentrifugin ja aiheuttaa henkilövahinkoja! 8
9 ( als/principles-of-centrifugation/balancing-your-rotor) Sentrifugointi käytännössä Varaa sentrifugi käyttöösi. Jos sentrifugoit tietyssä lämpötilassa (esimerkiksi +4 C), laita se ajoissa päälle ja säädä jäähtymään. Varmista, että roottori on tarkoitettu käyttämääsi sentrifugiin. Aseta roottori kammioon istukan päälle varovasti. Laita tasapainotetut näyteputket tai näyteputki ja vastinputki roottoriin. Sulje roottorin kansi alemmasta ruuvista, ja kiristä vielä kiinni yläruuvilla. Säädä sentrifugiin ajoaika, kierrosnopeus tai tarvittava g-arvo, roottorin tyyppi jos se tarvitaan, lämpötila. Käynnistä sentrifugi. Seuraa sentrifugia niin pitkään että ajonopeus on saavutettu! Ajon jälkeen: Sentrifugin kantta ei saa avata ennen kuin sentrifugi roottori on täysin pysähtynyt. Avaa roottorin kansi ja poista putket varovasti. Huomioi, missä on putken uloin kohta eli mihin kohtaan sakan pitäisi olla kerääntynyt. Jos sentrifugille ei ole varauksia, sammuta virta ja jätä kansi auki. Huolla roottori! Sentrifugointi: roottorin huolto Roottorit ovat kalliita ( ) ja niistä on pidettävä hyvää huolta. Kosteus ja suola voivat aiheuttaa roottorin korroosiota ja lyhentää käyttöikää Pese roiskeet heti miedolla pesuaineella, huuhtele ja kuivaa. Säilytä roottori ylösalaisin kylmässä, jolloin kondenssivesi poistuu. Älä poista putkia roottorista käyttäen teräviä esineitä. Naarmuuntuminen korroosio. Jos roottori ei lähde istukasta, irrota varovasti t- avaimella jottei istukka vaurioidu. Ultrasentrifugien käyttömääristä pidetään aina päiväkirjaa metalliväsymisen seuraamiseksi. Maahantuoja ja valmistaja seuraavat säännöllisesti roottorien kuntoa. Huonokuntoisen roottorin maksimikäyttönopeutta voidaan laskea, tai sen käyttö kieltää. Älä missään olosuhteissa ylitä valmistajan ilmoittamaa maksimiajonopeutta! Roottorin huoltoa: 9
10 Spektrofotometria UV IR Spektroskoopiset menetelmät tutkivat aineiden ja sähkömagneettisen säteilyn vuorovaikutuksia. Spektrofotometriassa tutkitaan näitä vuorovaikutuksia näkyvän valon aallonpituuksilla (noin 350 nm 800 nm), sekä ultravioletti- ja infrapunaaallonpituuksien lähialueilla. Biologiset molekyylit absorboivat UV-valoa, tai voivat reagoida kemiallisten yhdisteiden kanssa, muodostaen värillisen tuotteen, joka absorboi näkyvää valoa. UV/näkyvän alueen spektrofotometria (UVvis) on biokemian laboratorion perusmenetelmä. Puhtaalle molekyylille voidaan määrittää UVvis spektri mittaamalla absorboitunut säteily aallonpituuden funktiona. Spektriä voidaan käyttää molekyylin tunnistamiseen (kvalitatiivinen spektrofotometria). Spektrofotometria Spektrofotometriaa käytetään yleisimmin mittaamaan liuoksessa olevan aineen pitoisuutta (= kvantitatiivinen spektrofotometria). proteiinit nukleiinihapot Pitoisuuden määritys perustuu Beerin ja Lambertin lakiin. Sen mukaan valon absorption A määrä näytteessä on suoraan verrannollinen näytteen konsentraatioon. Tämä esitetään usein yhtälöllä: A = εlc ɛ = molaarinen absorptiokerroin (l*mol -1 *cm -1 ) l = valon kulkema matka näytteessä (cm) c = näytteen konsentraatio (mol/l) Kun tiedetään molaarinen absorptiokerroin (ɛ) voidaan absorbanssin perusteella laskea molekyylin pitoisuus liuoksessa. Spektrofotometri Spektrofotometri ( spekkari ) mittaa aineiden sähkömagneettisen säteilyn absorptiota eri aallonpituuksilla. Valonlähde UV-valo: vety- tai deuteriumlamppu Näkyvä valo: volframi-halogeenilamppu Monokromaattori (prisma tai taivehila) Hajottaa valon eri aallonpituuksille, niin että mittaus voidaan tehdä halutulla aallonpituudella. Peilit, linssit ja filtterit Puhdistavat edelleen valon halutulle aallonpituudelle. Kohdistavat valon näytekammioon. Näytekammio Säde johdetaan näytteen läpi. Näytetilavuus 50 µl 3 ml. Näyte tyypillisesti kvartsi- tai muovikyvetissä UV-alueella, muovi- tai lasikyvetissä näkyvän valon alueella. Detektori Havaitsee näytteeseen absorboituneen valon määrän ja muuttaa sen luettavaan muotoon. 10
11 Spektrofotometrin käyttö Mitattavan liuoksen täytyy olla homogeeninen ja kirkas, ei sakkainen tai samea. Myös ilmakuplat kyvetissä mittauskohdassa haittaavat mittausta. Ennen jokaista mittaussarjaa ja vaihdettaessa aallonpituutta spektrofotometri on nollatava (blank, nollanäyte, blankki ). Esimerkki: Nollanäytteessä sama värireagenssi ja sama liuotin kuin mitattavassa näytteessä. Nollataan spektrofotometri käyttäen tätä nollanäytteenä, jolloin mitattavan näytteen absorbanssista on vähennetty värireagenssin ja liuottimen mahdollinen absorbanssi nähdään vain mitattavan aineen absorbanssi. Konsentraation kasvaessa absorbanssi ei välttämättä enää muutu lineaarisesti! Näytteitä voi joutua laimentamaan ja tekemään uuden mittauksen. Lineaarinen mittausalue on useissa menetelmissä kapea, joten voidaan joutua valmistamaan useita näytelaimennoksia, jotta jokin niistä osuu oikealle mittausalueelle. Kun sopiva laimennos on löydetty ja mitattu, pitoisuus saadaan kertomalla tulos laimennoskertoimella. Onko mitatun näytteen A > 1? Laimenna ja mittaa uudestaan, jos et tiedä paremmin. NanoDropspektrofotometri Moderni mikrotilavuus-spektrofotometri. Kyvettiä ei käytetä: näytepisara (1-2 µl) pipetoidaan kahden valokuidun väliin. Käytetään DNA:n, RNA:n ja proteiinien konsentraation mittaamiseen älä käytä kursseilla värireaktioiden tai bakteerikasvustojen absorbanssin mittaamiseen. Konsentraation mittaamisessa mikrotilavuus-spektrofotometrin lineaarinen alue on perinteistä spektrofotometriä laajempi voidaan mitata laimentamatta jopa 50-kertaisesti vahvempia pitoisuuksia. Spektrofotometrian sovelluksia Laskuharjoitus: Olet eristänyt kaksijuosteista plasmidi- DNA:ta. Mittaat eristetyn DNA:n absorbanssit: A 260 = 0,544; A 280 = 0,291. Mikä on eristämäsi DNA:n konsentraatio? Mitä voit sanoa sen puhtaudesta? c = 0,544 * 50 µg/ml = 27,2 µg/ml A 260 /A 280 1,86 (DNA on suhdeluvun perusteella melko puhdasta) Nukleiinihappojen pitoisuuden ja puhtauden määritys liuoksesta (λ = 260 nm): Perustuu etenkin nukleiinihappojen emästen rengasrakenteiden absorptioon Kaksijuosteisella DNA:lla kun A 260 = 1, c = 50 µg / ml Yksijuosteisella DNA:lla kun A 260 = 1, c = 33 µg / ml Yksijuosteisella RNA:lla kun A 260 = 1, c = 40 µg / ml Proteiinit absorboivat voimakkaasti aallonpituudella 280 nm. A 260 /A suhdelukua on käytetty arvioimaan eristetyn DNA:n puhtautta: Puhtaalla DNA:lla A 260/A 280 = 1,8 Puhtaalla RNA:lla A 260/A 280 = 2,0 Matala suhdeluku voi kertoa näytteen kontaminoituneen suurella määrällä proteiinia, tai jollain puhdistukseen käytetyllä reagenssilla. Korkea suhdeluku voi kertoa RNA-kontaminaatiosta. 11
12 Spektrofotometrian sovelluksia Bakteerisolujen kasvun seuraaminen: Bakteerikasvuston absorbanssin mittaaminen aallonpituudella 600 nm kertoo kasvuston solumäärästä. Perustuu enemmänkin valon siroamiseen poispäin detektorista kiinteiden partikkelien (bakteerisolujen) vuoksi, kuin absorptioon. Esimerkiksi: halutaan aloittaa proteiinin tuotto bakteerien ollessa lineaarisessa kasvuvaiheessaan (A 600 0,6). Laimenna ja mittaa uudestaan, jos A > 0,8! Biokemiallisen reaktion nopeuden mittaaminen: Voidaan tutkia reaktiossa syntyvän tai kuluvan aineen määrän muutosta, joko suoraan jollain aallonpituudella absorboivan substraatin tai tuotteen kautta, tai välillisesti. Absorbanssin muutos ajan funktiona kertoo biokemiallisen reaktion kulusta. Spektrofotometrian sovelluksia Proteiinin pitoisuuden mittaaminen: Proteiinin pitoisuus voidaan selvittää suoraan mittaamalla absorbanssi aallonpituudella 280 nm: Kun A 280 = 1, proteiinipitoisuus on noin 1 mg/ml. Soveltuu puhdistettujen proteiinien pitoisuuksien määrittämiseen absorbanssi riippuu etenkin proteiinin tyrosiini- ja tryptofaani-aminohappojen määrästä. DNA ja RNA häiritsevät mittausta. Proteiiniseosten pitoisuus määritetään useimmiten erilaisilla kolorimetrisillä, värireaktioihin perustuvilla menetelmillä. Lowryn menetelmä: Alkaalinen kupari reagoi proteiinin peptidisidosten kanssa. Folin-Ciocalteu-reagenssi sitoutuu tyrosiini- ja tryptofaani aminohappoihin. Herkkyys noin 20 µg/ml - monet orgaaniset molekyylit häiritsevät mittausta. Bradfordin menetelmä; Coomassie Brilliant Blue väriaine sitoutuu proteiinien hydrofobisiin osiin. Herkkyys noin 5 µg/ml lyhyt lineaarinen alue! Proteiinipitoisuuden määritys standardikuvaajan avulla spektrofotometrisesti Proteiiniliuoksesta valmistetaan standardinäytesarja, ja tuntemattomasta näytteestä laimennokset ja niistä mitattavat näytteet. Kaikki näytteet tehdään rinnakkaisina (duplicate)! Värin muodostuttua nollataan spektrofotometri ja mitataan näytteiden absorbanssit. Saadut absorbanssit taulukoidaan, ja piirretään niiden perusteella standardikuvaaja (proteiinimäärä vs absorbanssi). Kuvaajalta luetaan tai kuvaajan yhtälöstä lasketaan tuntemattoman näytteen absorbanssia vastaava proteiinimäärä Lasketaan näytteen pitoisuus, huomioiden mahdollinen laimennoskerroin. 12
13 Proteiinipitoisuuden määritys Esimerkki: Tehtävänä on selvittää soluhomogenaatin proteiinipitoisuus, käyttäen Bradfordin testin microassaysovellusta. Käytetty Bradfordin microassay on lineaarinen konsentraatioalueella 1,2-10 µg/ml, kun standardiproteiinina käytetään lehmän seerumin albumiinia (BSA). Tunnetun konsentraation BSA-liuoksesta valmistetaan laimennokset, joiden konsentraatiot ovat 2, 5 ja 10 µg/ml. Soluhomogenaatista tehdään 1:100, 1:200 ja 1:400 laimennokset. Bradfordin microassay lyhyesti: Eppendorf-putkessa sekoitetaan: 800 µl proteiiniliuosta (standardi- tai näytelaimennos) 200 µl Bradford-reagenssia Sekoitetaan, annetaan seisoa 5 minuuttia RT Kaikki näytteet rinnakkaisina (kaksi näytettä / laimennos)! Tehdään samalla myös nollanäyte (800 µl dh 2O µl Bradford-reagenssia). Nollataan spektrofotometri nollanäytteellä, mitataan ja taulukoidaan standardien ja näytteiden A aallonpituudella 595 nm. A 595 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0, proteiinin konsentraatio (ug/ml) Näyte A 595 standardi 2 µg/ml 0,130 standardi 2 µg/ml 0,111 standardi 5 µg/ml 0,334 standardi 5 µg/ml 0,325 standardi 10 µg/ml 0,650 standardi 10 µg/ml 0,621 Piiretään millimetripaperille (tai taulukkolaskentaohjelmalla, esim. Excel) koordinaatisto, jossa x-akselilla proteiinin konsentraatio ja y-akselilla mitattu absorbanssi. Merkitään kaikki mitatut standardi-näytepisteet koordinaatistoon (ei esimerkiksi pelkästään näytepisteistä laskettuja keskiarvoja) Jos käytät millimetripaperia: käytä tila hyödyksi, pyri tekemään akseleista suunnilleen yhtä pitkät. A 595 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 Näyte A 595 standardi 2 µg/ml 0,130 standardi 2 µg/ml 0,111 standardi 5 µg/ml 0,334 standardi 5 µg/ml 0,325 standardi 10 µg/ml 0,650 standardi 10 µg/ml 0,621 y = 0,0641x - 0,0011 Piirretään standardikuvaaja joko käsin siten, että se sopii mahdollisimman hyvin näytepisteiden joukkoon, tai automaattisesti taulukkolaskentaohjelmaa käytettäessä. Esitä taulukkolaskentaohjelmaa käyttäessäsi myös kuvaajan yhtälö proteiinin konsentraatio (ug/ml) Huom! Standardikuvaaja ei pakoteta leikkaamaan origon kautta! Huom! Standardikuvaajaa ei ekstrapoloida kumpaankaan suuntaan! 13
14 A 595 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 y = 0,0641x - 0, proteiinin konsentraatio (ug/ml) Näyte A 595 c prot (µg/ml) standardi 2 µg/ml 0,130 standardi 2 µg/ml 0,111 standardi 5 µg/ml 0,334 standardi 5 µg/ml 0,325 standardi 10 µg/ml 0,650 standardi 10 µg/ml 0,621 näytelaimennos 1:100 0,731 - näytelaimennos 1:100 0,705 - näytelaimennos 1:200 0,350 5,48 näytelaimennos 1:200 0,371 5,80 näytelaimennos 1:400 0,166 2,61 näytelaimennos 1:400 0,170 2,67 Arvioidaan kuvaajasta tai lasketaan kuvaajan yhtälöstä näytelaimennosten proteiinikonsentraatiot. Huom! Standardien alueen ylittäviä näytelaimennoksia ei huomioida! Näyte A 595 c prot (µg/ml) (laimennos) standardi 2 µg/ml 0,130 standardi 2 µg/ml 0,111 standardi 5 µg/ml 0,334 standardi 5 µg/ml 0,325 standardi 10 µg/ml 0,650 standardi 10 µg/ml 0,621 näytelaimennos 1:100 0,731 - näytelaimennos 1:100 0,705 - näytelaimennos 1:200 0,350 5,48 1,096 näytelaimennos 1:200 0,371 5,80 1,160 näytelaimennos 1:400 0,166 2,61 1,044 näytelaimennos 1:400 0,170 2,67 1,068 c prot (mg/ml) c prot (mg/ml) dd keskiarvo 1,092 Rinnakkaisnäytteet määrityksissä Rinnakaisnäytteet, replikaatit (technical replicate) määrityksen tai kokeen sisällä tehdään, jotta voidaan kontrolloida kaikissa menetelmissä olevaa, ja pipetoinnin ja muun käsittelyn vaihtelusta johtuvaa hajontaa. Proteiinin määrityksessä vähintään kaksi rinnakkaisnäytettä. Joissain herkissä menetelmissä saatetaan tehdä kolme tai jopa neljä rinnakkaisnäytettä. Biokemiallisissa kokeissa puhutaan myös biologisista rinnakkaisnäytteistä (biological replicate). Tällä tarkoitetaan rinnakkaisnäytteitä, joilla kontrolloidaan biologisissa näytteissä ja järjestelmissä luonnostaan esiintyvää hajontaa. Varo sekoittamasta keskenään biologisia ja teknisiä replikaatteja. Esimerkki: Halutaan määrittää, miten poistogeenisen ja normaalin hiirilinjan maksan sappihapon määrä eroaa toisistaan. Molempien hiirilinjojen kohdalla kerätään kahdeksan eri hiiren maksasta näyte (= kahdeksan biologista replikaattia, n = 8). Mittauksessa tehdään jokaisesta maksapalasta sappihapon määritys kahdesta teknisestä replikaatista. 14
10.9.2015 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria
BIOKEMIAN MENETELMÄT I, SYKSY 2015 VASTAUKSET LUENTOMATERIAALIN TEHTÄVIIN: 10.9.2015 Pipetointi, sentrifugointi ja spektrofotometria Pesukoneen g-voimat: RCF (x g) = 1,119 10-5 (rpm)2 r = roottorin säde
Lisätiedot1. Nimeä kuvaan nuolien osoittamat reitit/tavat, joiden kautta haitalliset aineet voivat päästä elimistöön.
KOTITEHTÄVÄ 1 Biokemian menetelmät I syksy 2015 Opiskelijanumero: Kotitehtäviä saa miettiä ryhminä, mutta jokainen opiskelija palauttaa oman itsenäisesti käsin kirjoitetun vastauksen tehtäviin. Kotitehtävästä
Lisätiedotα-amylaasi α-amylaasin eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Tärkkelys Oligosakkaridit Maltoosi + glukoosi
n eristäminen syljestä ja spesifisen aktiivisuuden määritys. Johdanto Työssä eristetään ja puhdistetaan merkittävä ja laajalti käytetty teollisuusentsyymi syljestä. pilkkoo tärkkelystä ensin oligosakkarideiksi
LisätiedotMAIDON PROTEIININ MÄÄRÄN SELVITTÄMINEN (OSA 1)
MAIDON PROTEIININ MÄÄRÄN SELVITTÄMINEN (OSA 1) Johdanto Maito on tärkeä eläinproteiinin lähde monille ihmisille. Maidon laatu ja sen sisältämät proteiinit riippuvat useista tekijöistä ja esimerkiksi meijereiden
LisätiedotSpektrofotometria ja spektroskopia
11 KÄYTÄNNÖN ESIMERKKEJÄ INSTRUMENTTIANALYTIIKASTA Lisätehtävät Spektrofotometria ja spektroskopia Esimerkki 1. Mikä on transmittanssi T ja transmittanssiprosentti %T, kun absorbanssi A on 0, 1 ja 2. josta
LisätiedotROMUMETALLIA OSTAMASSA (OSA 1)
ROMUMETALLIA OSTAMASSA (OSA 1) Johdanto Kupari on metalli, jota käytetään esimerkiksi sähköjohtojen, tietokoneiden ja putkiston valmistamisessa. Korkean kysynnän vuoksi kupari on melko kallista. Kuparipitoisen
LisätiedotLimsan sokeripitoisuus
KOHDERYHMÄ: Työn kohderyhmänä ovat lukiolaiset ja työ sopii tehtäväksi esimerkiksi työkurssilla tai kurssilla KE1. KESTO: N. 45 60 min. Työn kesto riippuu ryhmän koosta. MOTIVAATIO: Sinun tehtäväsi on
LisätiedotMittausaallonpituuden optimointi
Mittausaallonpituuden optimointi Johdanto Biokemiallisia mittauksia tehdään usein spektrofotometrillä. Laitteen avulla voidaan mitata pitoisuuksia, sekä määrittää tuotteen puhtautta. Spektrofotometrillä
LisätiedotLABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI
LABORATORIOTYÖ: AGAROOSIGEELIELEKTROFOREESI Agaroosigeelielektroforeesi (AGE) on yksinkertainen ja tehokas menetelmä erikokoisten DNAjaksojen erottamiseen, tunnistamiseen ja puhdistamiseen. Eri valmistajien
LisätiedotOhjeita opettamiseen ja odotettavissa olevat tulokset SIVU 1
Ohjeita opettamiseen ja odotettavissa olevat tulokset SIVU 1 Toiminta aloitetaan johdattelulla. Tarkoituksena on rakentaa konteksti oppilaiden tutkimukselle ja kysymykselle (Boldattuna oppilaiden työohjeessa),
Lisätiedottesto 460 Käyttöohje
testo 460 Käyttöohje FIN 2 Pikaohje testo 460 Pikaohje testo 460 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Sensori 3 Näyttö 4 Toimintonäppäimet 5 Paristokotelo (laitteen takana) Perusasetukset Laite sammutettuna >
LisätiedotMIKSI ERI AINEET NÄYTTÄVÄT TIETYN VÄRISILTÄ? ELINTARVIKEVÄRIEN NÄKYVÄN AALLONPITUUDEN SPEKTRI
sivu 1/5 MIKSI ERI AINEET NÄYTTÄVÄT TIETYN VÄRISILTÄ? ELINTARVIKEVÄRIEN NÄKYVÄN AALLONPITUUDEN SPEKTRI Kohderyhmä: Kesto: Tavoitteet: Toteutus: Peruskoulu / lukio 15 min. Työn tavoitteena on havainnollistaa
Lisätiedottesto 831 Käyttöohje
testo 831 Käyttöohje FIN 2 1. Yleistä 1. Yleistä Lue käyttöohje huolellisesti läpi ennen laitteen käyttöönottoa. Säilytä käyttöohje myöhempää käyttöä varten. 2. Tuotekuvaus Näyttö Infrapuna- Sensori, Laserosoitin
LisätiedotBiokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016.
Biokemian menetelmät I kurssi, työselostukset, kevät 2016. DEADLINET: työselostus tulostettuna paperille Työ 3: To 24.3.2016 klo 15:00 KE1132:n palautuspiste tai BMTK:n Työ 2: Pe 1.4.2016 klo 16:00 KE1132:n
LisätiedotFOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA
FOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA KOHDERYHMÄ: Työ soveltuu yläkouluun kurssille elollinen luonto ja yhteiskunta. Lukiossa työ soveltuu parhaiten kurssille KE4. KESTO: Työ kestää n.1-2h MOTIVAATIO: Vaatteita
LisätiedotProteiinimääritys ja lineaarinen mittausalue
Proteiinimääritys ja lineaarinen mittausalue Johdanto Useimmiten laboratoriomittaukset tehdään niin, että mittaustulosta verrataan tunnettuun standardikuvaajaan. Tämän takia erilaisten laimennossarjojen
LisätiedotFOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA
FOSFORIPITOISUUS PESUAINEESSA TAUSTAA Pehmeä vesi on hyvän pesutuloksen edellytys. Tavallisissa pesupulvereissa fosfori esiintyy polyfosfaattina, joka suhteellisen nopeasti hydrolisoituu vedessä ortofosfaatiksi.
LisätiedotLiuenneen silikaatin spektrofotometrinen määritys
Liuenneen silikaatin spektrofotometrinen määritys 1. Työn periaate Liuenneen silikaatin määritys perustuu keltaisen silikomolybdeenihapon muodostumiseen. Keltainen kompleksi pelkistetään oksaalihapolla
LisätiedotRasvattoman maidon laktoosipitoisuuden määritys entsymaattisesti
Rasvattoman maidon laktoosipitoisuuden määritys entsymaattisesti 1. Työn periaate Esikäsitellyn näyteliuoksen sisältämä laktoosi hajotetaan (hydrolysoidaan) entsymaattisesti D-glukoosiksi ja D-galaktoosiksi
LisätiedotEksimeerin muodostuminen
Fysikaalisen kemian Syventävät-laboratoriotyöt Eksimeerin muodostuminen 02-2010 Työn suoritus Valmista pyreenistä C 16 H 10 (molekyylimassa M = 202,25 g/mol) 1*10-2 M liuos metyylisykloheksaaniin.
LisätiedotLABORATORIOTYÖ: RESTRIKTIOENTSYYMIDIGESTIO
LABORATORIOTYÖ: RESTRIKTIOENTSYYMIDIGESTIO Restriktioentsyymidigestio on yksi yhdistelmä-dna-tekniikan perusmenetelmistä, jossa katkaistaan kaksinauhainen DNA tietystä kohdasta erilaisten restriktioentsyymien
LisätiedotMIKSI ERI AINEET NÄYTTÄVÄT TIETYN VÄRISILTÄ? ELINTARVIKEVÄRIEN NÄKYVÄN AALLONPITUUDEN SPEKTRI
sivu 1/5 MIKSI ERI AINEET NÄYTTÄVÄT TIETYN VÄRISILTÄ? ELINTARVIKEVÄRIEN NÄKYVÄN AALLONPITUUDEN SPEKTRI TEORIA Spektroskopia on erittäin yleisesti käytetty analyysimenetelmä laboratorioissa, koska se soveltuu
LisätiedotOhjeita opettajille ja odotetut tulokset
Ohjeita opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1 Aktiviteetti alkaa toimintaan johdattelulla. Tarkoituksena on luoda konteksti oppilaiden tutkimukselle ja tutkimusta ohjaavalle kysymykselle (Boldattuna
Lisätiedot9500 FOTOMETRIN mittausohjeet
9500 FOTOMETRIN mittausohjeet Fotometrin ohjelmointinumero: Phot 7. KLOORI (DPD) Vapaan, sitoutuneen ja kokonaiskloorin analysointi vedestä. Fotometrinen menetelmä Automaattinen aallonmittaus Mittavälillä
LisätiedotHelsingin yliopisto/tampereen yliopisto Henkilötunnus - Biokemian/bioteknologian valintakoe Etunimet Tehtävä 5 Pisteet / 20
Helsingin yliopisto/tampereen yliopisto Henkilötunnus - Biokemian/bioteknologian valintakoe Sukunimi 24.5.2006 Etunimet Tehtävä 5 Pisteet / 20 Glukoosidehydrogenaasientsyymi katalysoi glukoosin oksidaatiota
LisätiedotLÄÄKETEHTAAN UUMENISSA
LÄÄKETEHTAAN UUMENISSA KOHDERYHMÄ: Soveltuu lukion KE1- ja KE3-kurssille. KESTO: n. 1h MOTIVAATIO: Työskentelet lääketehtaan laadunvalvontalaboratoriossa. Tuotantolinjalta on juuri valmistunut erä aspiriinivalmistetta.
LisätiedotProteiinituoton optimointi kuoppalevyllä
Proteiinituoton optimointi kuoppalevyllä Johdanto Ennen ison mittakaavan proteiinituottoja kasvatusolosuhteita kannattaa optimoida. Perinteisesti näitä on tehty käsityönä, mutta solukasvatusten seuranta
LisätiedotSUMUINEN AAMU METALLINKIERRÄTYSLAITOKSELLA
sivu 1/6 KOHDERYHMÄ: Työ on suunniteltu lukion kurssille KE4, jolla käsitellään teollisuuden tärkeitä raaka-aineita sekä hapetus-pelkitysreaktioita. Työtä voidaan käyttää myös yläkoululaisille, kunhan
LisätiedotALKOHOLIT SEKAISIN KOHDERYHMÄ:
ALKOHOLIT SEKAISIN KOHDERYHMÄ: Työ soveltuu lukion kursseille KE1, KE2 ja KE4. KESTO: Työ kestää n.1h MOTIVAATIO: Työ on havainnollinen ja herättää pohtimaan kaasujen kemiaa. TAVOITE: Työssä opiskelija
Lisätiedottesto 410-1 Käyttöohje
testo 410-1 Käyttöohje FIN 2 Short manual testo 410-1 Pikaohje testo 410-1 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Siipipyörä 3 Lämpötilasensori 4 Näyttö 5 Toimintonäppäimet 6 Paristokotelo (laitteen takana) Perusasetukset
LisätiedotKäyttöopas (ver. 1.29 Injektor Solutions 2006)
KombiTemp HACCP Elintarviketarkastuksiin Käyttöopas (ver. 1.29 Injektor Solutions 2006) web: web: www.haccp.fi 2006-05-23 KombiTemp HACCP on kehitetty erityisesti sinulle, joka työskentelet elintarvikkeiden
LisätiedotASPIRIININ MÄÄRÄN MITTAUS VALOKUVAAMALLA
ASPIRIININ MÄÄRÄN MITTAUS VALOKUVAAMALLA Jaakko Lohenoja 2009 Johdanto Asetyylisalisyylihapon määrä voidaan mitata spektrofotometrisesti hydrolysoimalla asetyylisalisyylihappo salisyylihapoksi ja muodostamalla
LisätiedotOnline DGA mittausteknologiat. Vaisala
Online DGA mittausteknologiat Online DGA laitteiden karkea jako: Yhden kaasun DGA, monikaasu DGA Indikaatio / Vikakaasu CO CO 2 CH 4 C 2 H 6 C 2 H 4 C 2 H 2 H 2 H 2 O Paperin ikääntymien X X X Öljyn hajoaminen
LisätiedotALKOHOLIPITOISUUDEN MÄÄRITYS OLUESTA KAASUKROMATOGRAFIL- LA
(1) ALKOHOLIPITOISUUDEN MÄÄRITYS OLUESTA KAASUKROMATOGRAFIL- LA 1. Standardiliuosten teko etanolista Arvioi, mikä on näytteen alkoholipitoisuus Valitse sen mukaan 3-4 standardiliuosta, jotka ovat näytteen
LisätiedotMark Summary. Taitaja2015. Skill Number 604 Skill Laborantti. Competitor Name
Summary Skill Number 604 Skill Laborantti ing Scheme Lock 04-05-2015 16:18:54 Final Lock 07-05-2015 13:26:03 Criterion Criterion Description s Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Total Award A Elintarvikeanalytiikka
LisätiedotLUE KÄYTTÖOHJE KOKONAISUUDESSAAN ENNEN LAITTEEN KÄYTTÖÄ SÄILYTÄ NÄMÄ OHJEET
TÄMÄ SISÄLTYY: Tuulettimen Virtapainike nopeuden merkkivalot Takasäleikkö EA I SK KE NEN I HA AL KO RK Etusäleikkö Vesisäiliö Tuulettimen nopeuspainike Valopainike USB-johto USB-virta-adapteri LUE KÄYTTÖOHJE
LisätiedotDistanceMaster One. Laser 650 nm SPEED SHUTTER
DistanceMaster One 36 Laser 650 nm SPEED SHUTTER Laser 02 2 x Typ AAA / LR03 1,5V / Alkaline DistanceMaster One x x y = m 2 y z x y x y z = m 3 03 ! Lue käyttöohje kokonaan. Lue myös lisälehti Takuu- ja
LisätiedotTyö 1: ph-indikaattorin tasapainovakion arvon määrittäminen spektrofotometrisesti
CHEM-C2200 Kemiallinen termodynamiikka Työ 1: ph-indikaattorin tasapainovakion arvon määrittäminen spektrofotometrisesti Työohje 1 Johdanto Happo-emäsindikaattorina käytetty bromitymolisininen muuttaa
LisätiedotALKOHOLIT SEKAISIN TAUSTAA
ALKOHOLIT SEKAISIN TAUSTAA Kaasukromatografia on menetelmä, jolla voidaan tutkia haihtuvia, orgaanisia yhdisteitä. Näyte syötetään tavallisesti ruiskulla injektoriin, jossa se höyrystyy ja sekoittuu inerttiin
LisätiedotSUMUINEN AAMU METALLINKIERRÄTYSLAITOKSELLA
SUMUINEN AAMU METALLINKIERRÄTYSLAITOKSELLA KOHDERYHMÄ: Työ on suunniteltu lukion kurssille KE4, jolla käsitellään teollisuuden tärkeitä raaka-aineita sekä hapetus-pelkitysreaktioita. Työtä voidaan käyttää
LisätiedotTyö 1: ph-indikaattorin tasapainovakion arvon määrittäminen spektrofotometrisesti
CHEM-C2200 Kemiallinen termodynamiikka Työ 1: ph-indikaattorin tasapainovakion arvon määrittäminen spektrofotometrisesti Työohje 1 Johdanto Happo-emäsindikaattorina käytetty bromitymolisininen muuttaa
Lisätiedottesto 510 Käyttöohje
testo 510 Käyttöohje FIN 2 Pikaohje testo 510 Pikaohje testo 510 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Paine-ero sensorin yhteet 3 Näyttö 4 Toimintonäppäimet 5 Paristokotelo ja magneetti (laitteen takana) Perusasetukset
Lisätiedottesto 610 Käyttöohje
testo 610 Käyttöohje FIN 2 Pikaohje testo 610 Pikaohje testo 610 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Kosteus- ja lämpötilasensori 3 Näyttö 4 Toimintonäppäimet 5 Paristokotelo (laitteen takana) Perusasetukset
LisätiedotVinkkejä opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1
Vinkkejä opettajille ja odotetut tulokset SIVU 1 Konteksti palautetaan oppilaiden mieliin käymällä Osan 1 johdanto uudelleen läpi. Kysymysten 1 ja 2 tarkoituksena on arvioida ovatko oppilaat ymmärtäneet
Lisätiedottesto 606-1 Käyttöohje
testo 606-1 Käyttöohje FIN 2 Pikaohje testo 606-1 Pikaohje testo 606-1 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Mittauspiikit 3 Näyttö 4 Toimintonäppäimet 5 Paristokotelo (laitteen takana) 6 Laitteen toimintatestausnastat
LisätiedotMark Summary Form. Tulospalvelu. Competitor No Competitor Name Member
Summary Form Skill Number 604 Skill Laborantti Criterion Criterion Description s Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Total Award A B C Elintarvikevalvonta Elintarvikevalvonta ja tutkimus Lääketurvallisuus 35.00 40.00
LisätiedotVasta-ainemääritys. Johdanto. www.edu.fi/biogeeni
Vasta-ainemääritys Johdanto Vasta-ainemääritys (engl. immunoassay) perustuu spesifisen vasta-aineen (engl. antibody) sitoutumiseen mitattavaan antigeeniin (engl. antigen). Menetelmän etuja ovat suuri herkkyys
LisätiedotKvantitatiivisen PCR:n käyttö mikrobivaurion toteamisessa
Kvantitatiivisen PCR:n käyttö mikrobivaurion toteamisessa Maria Valkonen, Kaisa Jalkanen, Martin Täubel, Anne Hyvärinen 31.3.2014 Sisäilmastoseminaari 2014 1 Tausta Asumisterveysoppaan mukaiset sisäympäristön
Lisätiedotd sinα Fysiikan laboratoriotyöohje Tietotekniikan koulutusohjelma OAMK Tekniikan yksikkö TYÖ 8: SPEKTROMETRITYÖ I Optinen hila
Fysiikan laboratoriotyöohje Tietotekniikan koulutusohjelma OAMK Tekniikan yksikkö TYÖ 8: SPEKTROMETRITYÖ I Optinen hila Optisessa hilassa on hyvin suuri määrä yhdensuuntaisia, toisistaan yhtä kaukana olevia
LisätiedotLyhyt käyttöohje Cafitesse 400
Lyhyt käyttöohje Cafitesse 400 stop BREWING heißes wasser B-2264 empty low temperature empty Käyttöohje Cafitesse 400 - LED-merkkivalot LED (vihreä) LED (keltainen) LED (punainen) LED (punainen) stop BREWING
LisätiedotKaasumittaukset jatkuvatoimiset menetelmät 1. Näytteenotto 1 Näytteenottolinja
Kaasumittaukset jatkuvatoimiset menetelmät 1 Näytteenotto 1 Näytteenottolinja Kaasumittaukset jatkuvatoimiset menetelmät 2 Näytteenotto 2 Näytteenkäsittelytekniikat y Suositus: näytekaasu suoraan kuumana
LisätiedotKÄYTTÖOHJE BONECO P340
93 KÄYTTÖOHJE BONECO P340 94 YLEISKUVA JA OSIEN NIMET 4 5 1 Suojakansi 1 2 3 2 Esisuodatin 3 Suodatin A341 4 BONECO P340 5 Ohjauspaneeli ja näytöt 95 SISÄLTÖ Yleiskuva ja osien nimet 94 Toimitussisältö
LisätiedotQIAsymphony SP protokollatietolehtinen
Helmikuu 2017 QIAsymphony SP protokollatietolehtinen circdna_2000_dsp_v1 ja circdna_4000_dsp_v1 Tämä asiakirja on QIAsymphony circdna_2000_dsp_v1:n ja circdna_4000_dsp_v1:n protokollatietolehtinen, versio
LisätiedotKÄYTTÖOPAS. Tarkkuuskosteus-lämpömittari. Malli RH490
KÄYTTÖOPAS Tarkkuuskosteus-lämpömittari Malli RH490 Johdanto RH490-kosteus-lämpömittari mittaa kosteutta, ilman lämpötilaa, kastepistelämpötilaa, märkälämpötilaa ja vesihöyryn määrää ilmassa. Edistyneitä
Lisätiedota) Piirrä hahmotelma varjostimelle muodostuvan diffraktiokuvion maksimeista 1, 2 ja 3.
Ohjeita: Tee jokainen tehtävä siististi omalle sivulleen/sivuilleen. Merkitse jos tehtävä jatkuu seuraavalle konseptille. Kirjoita ratkaisuihin näkyviin tarvittavat välivaiheet ja perustele lyhyesti käyttämästi
LisätiedotKÄYTTÖOHJEKIRJA HALO R400 LASER ETÄISYYS MITTARILLE
KÄYTTÖOHJEKIRJA HALO R400 LASER ETÄISYYS MITTARILLE MYYNTIPAKETIN SISÄLTÖ ALKUTOIMENPITEET 1) Liuta/ työnnä auki patterikotelon kansi laitteen takaosasta ja aseta patteri paikkoilleen. Patterin tyyppi
LisätiedotTørr. Dehumidifier. Bruksanvisning Bruksanvisning Brugsanvisning Käyttöohje Instruction manual DH-10
Tørr Dehumidifier Bruksanvisning Bruksanvisning Brugsanvisning Käyttöohje Instruction manual Ugit officia porem et ent, inctorem resent volorumqui bearum corestota et ut am quo magnihitae. DH-10 S. 2 DH-10
LisätiedotKäyttöohje, ohjauspaneeli Balboa TP600
Käyttöohje, ohjauspaneeli Balboa TP600 Tälle ohjauspaneelille on mahdollista saada wifi-ohjaus, kysy lisää huolto@allastarvike.fi Näppäimien nimet voivat vaihdella valmistajan ja mallin mukaan. Altaan
LisätiedotFYSIIKAN LABORATORIOTYÖT 2 HILA JA PRISMA
FYSIIKAN LABORATORIOTYÖT HILA JA PRISMA MIKKO LAINE 9. toukokuuta 05. Johdanto Tässä työssä muodostamme lasiprisman dispersiokäyrän ja määritämme työn tekijän silmän herkkyysrajan punaiselle valolle. Lisäksi
LisätiedotInfrapunalämpömittari CIR350
Infrapunalämpömittari CIR350 Käyttöopas (ver. 1.2) 5/23/2006 Johdanto Injektor solutionsin CIR350 infrapunalämpömittari tarjoaa sinulle laadukkaan laitteen huokeaan hintaan. Tämän laitteen etuja ovat Optiikka
LisätiedotVOC-näytteen ottaminen FLEC-laitteella
Sivu 1 / 5 VOC-näytteen ottaminen FLEC-laitteella Valmistelut Tarkista, että sinulla on kaikki tarvittavat välineet näytteenottoa varten: FLEC-kupu 1 puhaltava pumppu (violetti väri) 2 imevää pumppua (sininen
LisätiedotBiohitin Optifit Kärjet
Biohitin Optifit Kärjet Turvallisuutta ja tarkkuutta Ekologiset pakkausvaihtoehdot! Biohit Optifit Kärjet 1) Paras yhteensopivuus Täydellinen yhteensopivuus ja kiinnittyminen Biohitin pipetteihin Ergonomisesti
LisätiedotHuolehdi siitä, että puhelimen akussa on riittävästi virtaa ja pidä puhelin aina päällä. Varmista, että puhelimesi bluetooth-yhteys on päällä.
TIETOA MITTAUKSESTA Olet saanut käyttöösi Elisa Etämittaus sovelluksen sekä CoaguChek INRange -mittalaitteen (kuva oikealla). CoaguChek INRange -mittalaitteella ja CoaguChek XS PT Test PST -testeillä mitataan
LisätiedotKoneistusyritysten kehittäminen. Mittaustekniikka. Mittaaminen ja mittavälineet. Rahoittajaviranomainen: Satakunnan ELY-keskus
Koneistusyritysten kehittäminen Mittaustekniikka Mittaaminen ja mittavälineet Rahoittajaviranomainen: Satakunnan ELY-keskus Yleistä Pidä työkalut erillään mittavälineistä Ilmoita rikkoutuneesta mittavälineestä
LisätiedotHI ja HI ph/ec/tds/ C Mittarit
Käyttöohje 1 HI9811-5 ja HI9812-5 ph/ec/tds/ C Mittarit Käyttöohje Sisällysluettelo Käyttöohje 2 Yleistä...3 Laitteen käyttö...4 Alkuvalmistelut...4 ph-mittaus...4 EC/TDS-mittaus...4 Lämpötilamittaus...5
LisätiedotLyhyt käyttöohje Cafitesse 110
Lyhyt käyttöohje Cafitesse 110 B-2170 Merkkivalojen selitys Keltainen merkkivalo (1) Alilämpötilan näyttö Punainen merkkivalo (2) Tyhjän säiliön näyttö STOP MAHDOLLISET VIAT Jos laite ei toimi moitteettomasti,
LisätiedotKÄYTTÖOHJEET Serie RV
KÄYTTÖOHJEET Serie RV Laskentavaakajärjeste1mä 3.2 Virhe laskentapunnituksessa Laskentapunnituksen virhe johtuu pääasiassa kolmesta tekijästä:. detaljien painojen poikkeamista vaaka näyttää väärin inhimillisestä
LisätiedotMikroskooppisten kohteiden
Mikroskooppisten kohteiden lämpötilamittaukset itt t Maksim Shpak Planckin laki I BB ( λ T ) = 2hc λ, 5 2 1 hc λ e λkt 11 I ( λ, T ) = ε ( λ, T ) I ( λ T ) m BB, 0 < ε
LisätiedotSample to Insight. DNA_Buffy_Coat_400_V6_DSP-protokolla. Joulukuu 2017 QIAsymphony SP -protokollalomake
Joulukuu 2017 QIAsymphony SP -protokollalomake DNA_Buffy_Coat_400_V6_DSP-protokolla Tämä asiakirja on DNA_Buffy_Coat_400_V6_DSP QIAsymphony SP -protokollalomake, R3, QIAsymphony DSP DNA Mini Kit -tarvikesarjalle,
Lisätiedotdekantterilaseja eri kokoja, esim. 100 ml, 300 ml tiivis, kannellinen lasipurkki
Vastuuhenkilö Tiina Ritvanen Sivu/sivut 1 / 5 1 Soveltamisala Tämä menetelmä on tarkoitettu lihan ph:n mittaamiseen lihantarkastuksen yhteydessä. Menetelmää ei ole validoitu käyttöön Evirassa. 2 Periaate
LisätiedotSauvasekoitin Metos Junior Standard 4248000. Käyttöohjeet. Käännös valmistajan englanninkielisestä ohjeesta
Sauvasekoitin Metos Junior Standard 4248000 Käyttöohjeet Käännös valmistajan englanninkielisestä ohjeesta SISÄLLYSLUETTELO 1. Laitteen osat... 3 2. Käyttö... 4 3. Puhdistus ja huolto... 5 4. Turvallisuusohjeita...
LisätiedotVOC-näytteen ottaminen FLEC-laitteella
AO06 Sivu 1 / 5 VOC-näytteen ottaminen FLEC-laitteella Valmistelut Tarkista, että sinulla on kaikki tarvittavat välineet näytteenottoa varten: FLEC-kupu 1 puhaltava pumppu (violetti väri) 2 imevää pumppua
LisätiedotThe acquisition of science competencies using ICT real time experiments COMBLAB. Kasvihuoneongelma. Valon ja aineen vuorovaikutus. Liian tavallinen!
Kasvihuoneongelma Valon ja aineen vuorovaikutus Herra Brown päätti rakentaa puutarhaansa uuden kasvihuoneen. Liian tavallinen! Hänen vaimonsa oli innostunut ideasta. Hän halusi uuden kasvihuoneen olevan
LisätiedotFI 10 KÄYTTÖ. 650 mm min.
OHJEET JA SUOSITUKSET Nämä käyttöohjeet koskevat useita tuuletintyyppejä. On mahdollista, että tekstissä on yksityiskohtia, jotka eivät koske valitsemaasi tuuletinta. ASENNUS Valmistaja ei vastaa virheellisestä
LisätiedotITE tyhjiöpumput. Käyttöohje. Onninen Oy - Kylmämyynti
ITE tyhjiöpumput Käyttöohje Sisältö Turvallisuusohjeet 3 Öljyntäyttö 3 Öljyn vaihto 3 Gas ballast 3 Toiminta 4 Osat 5 Tekniset tiedot 6 Takuu 7 3 T u r v a l l i s u u s o h j e e t Ennen ensikäyttöä täytä
LisätiedotMovair AF 170. Käyttöohje. Korvent Oy Vanha Nurmijärventie 116 01730 VANTAA FINLAND
Movair AF 170 Käyttöohje Korvent Oy Vanha Nurmijärventie 116 01730 VANTAA FINLAND Sisällysluettelo Yleistä... 3 Varoitus!... 3 Laitteen käyttö ja suodattimien vaihto... 4 Alipaineistajan käyttö... 4 Suodattimien
LisätiedotKEMIALLINEN WC KÄYTTÖOHJE
KEMIALLINEN WC KÄYTTÖOHJE 1. Ominaisuudet a. valmistettu korkealaatuisesta polyeteenistä b. täysin omavarainen c. ei vaadi ulkoisia liitäntöjä d. varmatoimiset lukot ja saranat e. kaikki osat käyttäjän
LisätiedotCHEM-A1200 kurssin laboratoriotöiden tulosten yhteenveto syksy 2016
CHEM-A1200 kurssin laboratoriotöiden tulosten yhteenveto syksy 2016 Näyte Sundown Naturals Vaikuttava aine on kuivattu ferrosulfaatti FeSO 4. Valmistajan mukaan yksi tabletti sisältää 202 mg kuivaa ferrosulfaattia
Lisätiedottesto 511 Käyttöohje
testo 511 Käyttöohje FIN 2 Pikaohje testo 511 Pikaohje testo 511 1 Suojakansi: käyttöasento 2 Paine sensorin yhde 3 Näyttö 4 Toimintonäppäimet 5 Paristokotelo ja magneetti (laitteen takana) Perusasetukset
LisätiedotLIIAN TAIPUISA MUOVI TAUSTAA
LIIAN TAIPUISA MUOVI Muoviteollisuuden laboratoriossa on huomattu, että tuotannosta tullut muovi on liian taipuisaa. Tämän vuoksi laadunvalvontalaboratorio tutkii IR:n avulla eteenin pitoisuuden muovissa.
LisätiedotTUOTEKORTTI JA KÄYTTÖOHJE. Otsonaattori ammattikäyttöön
1. TUOTEKORTTI JA KÄYTTÖOHJE Otsonaattori ammattikäyttöön OZO MINI Ozo Mini on otsonaattori, joka soveltuu hajujen poistamiseen esimerkiksi navettakeittiöistä tai muista tiloista, joissa vaaditaan jatkuvaa
LisätiedotMittalaite ja puhelin on laitettu toimimaan automaattisesti yhdessä, sinun tulee seurata puhelimen antamia ohjeita mittauksen suorittamiseen.
TIETOA MITTAUKSESTA VERENPAINE Olet saanut käyttöösi Beurer-mittalaitteen ja puhelimen. Mittalaitteella mitataan verenpaine ja syke. Mittauksen jälkeen puhelin lähettää mitatut arvot hoitajalle. Käsittele
LisätiedotWK-6 WATER KETTLE BRUKSANVISNING BRUKSANVISNING BRUGSANVISNING KÄYTTÖOHJE INSTRUCTION MANUAL
WK-6 WATER KETTLE NO SE DK FI GB BRUKSANVISNING BRUKSANVISNING BRUGSANVISNING KÄYTTÖOHJE INSTRUCTION MANUAL WWW.WILFA.COM VEDENKEITIN FIN KÄYTTÖOHJE Lue tämä käyttöohje huolella ennen vedenkeittimen käyttöönottoa
LisätiedotMuita tyyppejä. Bender Rengas Fokusoitu Pino (Stack) Mittaustekniikka
Muita tyyppejä Bender Rengas Fokusoitu Pino (Stack) 132 Eri piezomateriaalien käyttökohteita www.ferroperm.com 133 Lämpötilan mittaaminen Termopari Halpa, laaja lämpötila-alue Resistanssin muutos Vastusanturit
LisätiedotLämpömittari TTX100/110/120
Lämpömittari TTX100/110/120 2(18) Hyvä asiakas, Onnittelut tämän Ebro tuotteen hankinnan kunniaksi. Toivottavasti tämä tuote palvelee pitkään ja tästä tuotteesta on hyötyä työntekoon. Tärkeä ja hyödyllinen
LisätiedotNikkeliraaka-aineiden epäpuhtausprofiilin määritys
Nikkeliraaka-aineiden epäpuhtausprofiilin määritys Analytiikkapäivät Kokkola 28.11.2012 Paul Cooper 1 Sisältö Tavoitteet Analyyttiset menetelmät / näytteen valmistus Nikkeliraaka-aineiden mittaaminen XRF:llä
LisätiedotPULLEAT VAAHTOKARKIT
PULLEAT VAAHTOKARKIT KOHDERYHMÄ: Työ soveltuu alakouluun kurssille aineet ympärillämme ja yläkouluun kurssille ilma ja vesi. KESTO: Työ kestää n.30-60min MOTIVAATIO: Työssä on tarkoitus saada positiivista
LisätiedotVOC NÄYTTEENOTTO FLEC LAITTEELLA (sovellettu NT BUILD 484 STANDARDISTA)
Sivu 1 (5) VOC NÄYTTEENOTTO FLEC LAITTEELLA (sovellettu NT BUILD 484 STANDARDISTA) HUOMIOT Laitteen tiiveyttä voi parantaa asettamalla FLEC:n päälle painoja. Jos epäilet, että mitatun pinnan emissio on
LisätiedotKÄYTTÖOHJE TRMS AC VIRTAMITTARI TRIFITEK TR-FLEX
KÄYTTÖOHJE TRMS AC VIRTAMITTARI TRIFITEK TR-FLEX Trifitek Finland Oy 2014 1. YLEISTÄ Tämä käyttöohje sisältää tietoja ja varoituksia, joita on noudatettava, jotta mittalaitetta voidaan käyttää turvallisesti
LisätiedotLiian taipuisa muovi
Muoviteollisuuden laboratoriossa on huomattu, että tuotannosta tullut muovi on liian taipuisaa. Tämän vuoksi laadunvalvontalaboratorio tutkii IR:n avulla eteenin pitoisuuden muovissa. TAUSTAA Polypropeeni
LisätiedotKemian opetuksen keskus Helsingin yliopisto Veden kovuus Oppilaan ohje. Veden kovuus
Huomaat, että vedenkeittimessäsi on valkoinen saostuma. Päättelet, että saostuma on peräisin vedestä. Haluat varmistaa, että vettä on turvallista juoda ja viet sitä tutkittavaksi laboratorioon. Laboratoriossa
LisätiedotDistanceMaster 80 DE 04 GB 11 NL 18 DK 25 FR 32 ES 39 IT 46 PL 53 FI 60 PT 67 SE 74 NO TR RU UA CZ EE LV LT RO BG GR
DistanceMaster 80 DE GB NL DK FR ES IT PL PT SE NO TR RU UA CZ EE LV LT RO BG GR 04 11 18 25 32 39 46 53 60 67 74 ! a h i b 2. 4. 6.! 60 Lue lisäohjeet. käyttöohje Noudata kokonaan. annettuja Lue ohjeita.
LisätiedotSUMUINEN AAMU METALLINKIERRÄTYSLAITOKSELLA
SUMUINEN AAMU METALLINKIERRÄTYSLAITOKSELLA Työskentelet metallinkierrätyslaitoksella. Asiakas tuo kierrätyslaitokselle 1200 kilogramman erän kellertävää metallimateriaalia, joka on löytynyt purettavasta
LisätiedotKALIUMPERMANGANAATIN KULUTUS
sivu 1/6 Kohderyhmä: Työ on suunniteltu lukiolaisille Aika: n. 1h + laskut KALIUMPERMANGANAATIN KULUTUS TAUSTATIEDOT tarkoitaa veden sisältämien kemiallisesti hapettuvien orgaanisten aineiden määrää. Koeolosuhteissa
Lisätiedottesto 104 Elintarvikelämpömittari Käyttöohje
testo 104 Elintarvikelämpömittari Käyttöohje fin 2 1. Yleistä 3 1. Yleistä Lue käyttöohje huolellisesti ennen laitteen käyttöönottoa. Talleta käyttöohje myöhempää käyttöä varten. de en 2. Tuotekuvaus it
LisätiedotCHEM-C2230 Pintakemia. Työ 2: Etikkahapon adsorptio aktiivihiileen. Työohje
CHEM-C2230 Pintakemia Tö 2: Etikkahapon orptio aktiivihiileen Töohje 1 Johdanto Kaasun ja kiinteän aineen rajapinnalla tapahtuu leensä kaasun orptiota. Mös liuoksissa tapahtuu usein liuenneen aineen orptiota
LisätiedotPotilasopas. Tämän oppaan omistaa:
Potilasopas Tämän oppaan omistaa: Icare HOME (Malli: TA022) POTILASOPAS TA022-035 FI-3.1 3 Johdanto Tämä opas sisältää Icare HOME -tonometrin käyttöohjeet. Lue ohjeet huolellisesti, ennen kuin alat käyttää
LisätiedotKÄYTTÖOHJE ELTRIP-R6. puh. 08-6121 651 fax 08-6130 874 www.trippi.fi seppo.rasanen@trippi.fi. PL 163 87101 Kajaani
KÄYTTÖOHJE ELTRIP-R6 PL 163 87101 Kajaani puh. 08-6121 651 fax 08-6130 874 www.trippi.fi seppo.rasanen@trippi.fi SISÄLLYSLUETTELO 1. TEKNISIÄ TIETOJA 2. ELTRIP-R6:n ASENNUS 2.1. Mittarin asennus 2.2. Anturi-
Lisätiedot782630S Pintakemia I, 3 op
782630S Pintakemia I, 3 op Ulla Lassi Puh. 0400-294090 Sposti: ulla.lassi@oulu.fi Tavattavissa: KE335 (ma ja ke ennen luentoja; Kokkolassa huone 444 ti, to ja pe) Prof. Ulla Lassi Opintojakson toteutus
LisätiedotKarting tekniikkakoulutus KF 6
Karting tekniikkakoulutus KF 6 KF6 moottorin luokitus Tarkista aina ensin: Moottorin luokitusnumero esim. 3/KF6/14 Moottorin numero esim. 10022 Onko ko. moottori luokituskuvien mukainen ulkoisesti. 3 KF6
Lisätiedot