Ajankohtaista mikrobiologisista menetelmistä

Ajankohtaista mikrobiologisista menetelmistä Ajankohtaista laboratoriorintamalla 13.10.2010 Erikoistutkija, jaostopäällikkö Tuula Johansson Evira 1

ISO - menetelmäkehitystyö Uudistettavana olevat mikrobiologiset menetelmät ja ohjeistukset 2

Salmonellat ISO 6579 kolme osaa 1. Osoittaminen 2. Lukumäärän määrittäminen 3. Serotyypitys Typhi ja Paratyphi -serotyyppien osoittaminen liitteeksi - seleniitti-kystiini rikastus RVS tai MSRV mahdollisesti vaihtoehtoiseksi elintarvikkeille XLD säilyy pakollisena eristysmaljana Toisen maljan valinnalle nykyistä selkeämpi ohjeistus 3

Salmonellat (2) ISO 6579 Ohjeistus maljauksesta ja varmistettavien pesäkkeiden määrästä vähemmän ohjailevaksi Puhdasviljelmät voidaan viljellä selektiiviselle maljalle Tutkitaan tiettyjen biokemiallisten varmistuskokeiden hyödyllisyyttä 4

Listeria monocytogenes ISO 11290-1 ja -2 L. monocytogenes ja muut Listeria-lajit osoittaminen ja määrittäminen Kuten nykyinen standardi + muutoslehti, mutta: 1. Listeria-lajit varmistus: katalaasi ja gram valinnaisia ja liikkuvuus, jos tarpeen 1. L. monocytogenes: lisäksi hemolyysi (mikäli tulos epäselvä CAMP), ramnoosi, ksyloosi ja VP-koe 5

Kampylobakteerit ISO 10272 Neljä osaa Osat 1 ja 2 - Campylobacter spp. Osoittaminen ja määrittäminen Osa 3 - Semikvantitatiivinen määritys Osa 4 - Osoittaminen alkutuotannon näytteistä (eläimet ja niiden tuotantoympäristö) Lisäksi työstetään standardia alkutuotannon näytteiden käsittelystä laboratoriossa 6

Yersiniat ISO 10273 alustavasti patogeeninen Yersinia enterocolitica - viljelymenetelmä Uudistustyö käynnistymässä Tarkoituksena tehdä koordinoidusti NMKLn kanssa Myös PCR-menetelmä työstettävänä - sekä Y. enterocolitica että pseudotuberculosis 7

ISO-standardisointi viivästynyt Keskeisimmät uudistettavana olevat EN/ISO -menetelmät on tarkoitus validoida kollaboratiivisella tutkimuksella EU-komissiolta on odotettu viime vuodet rahoituspäätöstä asia ei ole toistaiseksi selvinnyt ISO on päättänyt, että ellei rahoituksesta saada virallista vastausta syykuun 2010 loppuun mennessä, jatketaan standardien työstämistä ilman kollaboratiivisista tutkimuksista saatavaa validointitietoa 8

Seuraavat työkohteet ovat ns. waiting statuksella ja ne odottavat hygieniamandaatin rahoitusselvittelyjä ennen aktivoimista Detection of food-borne viruses in food based on PCR technique Detection and quantification of histamine Detection of staphylococcal enterotoxin for dairy products and other matrices Detection of Bacillus cereus enterotoxin in food (emetic and diarrheal toxin) pren ISO 16654 rev Horizontal method for the detection of E.coli O157 pren ISO 11290-1 rev Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes - Part 1: Detection method pren ISO 11290-2 rev Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes - Part 2: Enumeration method pren ISO 10272-1 rev Horizontal method for the detection and enumeration of Campylobacter spp. pren ISO 10272-2 Horizontal method for the detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 2: Colony count technique 9

waiting statuksella pren ISO 10273 rev Horizontal method for the detection of Yersinia enterocolitica pren ISO 28942 Detection of Enterobacter sakazakii Horizontal method for the detection of pathogenic Vibrio - Part 1: Detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae Horizontal method for the detection of pathogenic Vibrio - Part 2: Detection of species other than Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae Horizontal method for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae - Part 1: Detection and enumeration by MPN technique with pre-enrichment Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - Detection of botulinum neurotoxin type A, B, E and F - producing clostridia Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 4: Detection and enumeration of Campylobacter spp. in samples from primary production (from animals and their environment) 10

ISO/CEN - Muita valmisteilla olevia työkohteita (1) pren ISO 22118 PCR for the detection and quantification of foodborne pathogens - Performance characteristics pren ISO 22119 Real-time PCR for the detection of food-borne pathogens - General requirements and definitions FprEN ISO 6887-5 Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products (ISO/FDIS 6887-5:2009) EN ISO 6887-4:2003/prA1 Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (ISO 6887-4:2003/DAM 1:2010) 11

Muut valmisteilla olevia työkohteita (2) pren ISO 4833-2 Method for the enumeration of microorganisms - Part 2: Surface colony count technique at 30 C CEN ISO/TS 11133-2:2003/prA1 Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media EN ISO 7218:2007/prA1 General requirements and guidance for microbiological examinations (ISO 7218:2007/NP Amd 1:2008 pren ISO 11133 rev Preparation, production, storage and performance testing of culture media pren ISO 4833-1 rev Horizontal method for the enumeration of microorganisms - Colony-count technique at 30 degrees C 12

Muut valmisteilla olevia työkohteita (3) pren ISO 6887-6 Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 6 Specific rules for the preparation of samples taken at the primary production stage pren ISO 13307 Primary Production Stage - Sampling techniques pren ISO 16140-1 rev Protocol for the validation of alternative methods - Part 1: Terminology of method validation pren ISO 16140-2 rev Protocol for the validation of alternative methods - Part 2: Protocol for the validation of proprietary methods against a reference method pren ISO 16654 rev Horizontal method for the detection of E.coli O157 13

NMKL - menetelmäkehitystyö Uudistettavana olevat mikrobiologiset menetelmät ja ohjeistukset 14

NMKL 67 Bacillus cereus määrittäminen uudistettu ja painatusvaiheessa nimi alustavaksi B. cereus bakteeriksi veriagar tai vaihtoehtoisesti sekä veriagar että Bacillus cereus -selektiiviagar tai kromogeeniagar Cereus-Ident varmistus Bacillus cereus -selektiiviagarille tai Cereus-Ident-Agarille 15

NMKL No 136 (5. painos, 2010) Listeria monocytogenes osoittaminen ja määrittäminen Muutokset toimituksellisia verrattuna edelliseen painokseen (4. painos 2007), mm. diagrammien lisääminen työvaiheiden kuvaamiseksi havainnollisesti Hienoinen asiamuutos Mikäli osoittaminen ja määrittäminen tehdään yhtäaikaisesti, riittää, että tyypilliset, ß-henolyyttiset pesäkkeet varmistetaan vain määritysmenetelmän yhteydessä Menetelmään huomautus: Mikäli ALOA ensisijainen selektiivinen agar, menetelmä = EN/ISO 11290-1 ja 2 Menetelmä hyväksytty 16

NMKL 80 Clostridium botulinum osoittaminen NMKL 79 Botulinum-toksiinin osoittaminen NMKL 80 - osoittaminen elintarvikkeista ja muista näytemateriaaleista - PCR Odotetaan EN/ISO PCR-menetelmää, joka teknisenä menetelmäluonnoksena Kun patenttiselvitys ratkennut, aktiiviseen työvaiheeseen NMKL 79 - Toksiinin osoittaminen elintarvikkeista, verestä ja muista näytemateriaaleista Odottaa lopullista hyväksyntää Ei tehdä kollaboratiivista tutkimusta, koska ei laboratorioita 17

NMKL 68 Enterococcus määrittäminen Menetelmäehdotuksen laatiminen saatujen kommenttien perusteella Gram-negatiiviset bakteerit maidosta ja kermasta. Jälkisaastumisen osoittaminen. Menetelmäehdotus lähdössä arvioitavaksi ja hyväksyttäväksi kontaktihenkilöille 18

NMKL 117 Yersinia enterocolitica. Osoittaminen elintarvikkeista viljelymenetelmällä Referentti Saija Hallanvuo on tehnyt alustavia validointitutkimuksia Työvaliokunta myöntänyt rahoitusta jatkotyölle, jossa vertaillaan tiettyjä rikastusvaihtoehtoja Menetelmävertailu referentin laboratoriossa käynnistymässä: ISO, NMKL vuodelta 1996 ja mahdollinen kolmas vaihtoehto 19

NMKL 117 Yersinia enterocolitica ja pseudotuberculosis PCR-menetelmä osoittamiseksi elintarvikkeista Odotetaan CEN-menetelmäehdotusta, joka valmistuu vuoden kuluessa Tällä hetkellä työtä tehdään CENin ryhmässä ja menetelmäluonnos noudattaa Ruotsin mallia Tällöin päätös, valitaanko Ruotsin (Susanne Thisted-Lambertz) menetelmä vaiko CENmenetelmäehdotus 20

Shigella NMKL 151 Osoittaminen elintarvikkeista viljelymenetelmällä Referentti ja kontaktihenkilöt nimetty Työ aloitetaan loppuvuodesta NMKL 174 Osoittaminen PCR-menetelmällä Vuoden 2010 lopussa referentti aloittaa validointityöt: DNA-eristykset, reaaliaikainen PCR ja perinteinen PCR Menetelmäehdotuksen työstäminen 2011 21

Verosytotoksiinia tuottava E. coli VTEC O26, O103, O111; O157 ja O145 Työ aloitettu 2002 Työtä tehty myös ISOn puitteissa Otetaan uudelleen ohjelmaan 2010 ja nimetään uusi työryhmä, joka laatii menetelmäehdotuksen perustuen ISO/CEN menetelmään, mutta käyttäjäystävällisemmän Referentin ja kontaktihenkilöiden nimeäminen 2010 aikana 22

Mahdollisesti uusittavia menetelmiä Uusimistarpeen arviointi: kollaboratiivisesti validoidut 10 vuoden ja muut 5 vuoden välein tai tarvittaessa Ei uusita NMKL 98, 2005, 4 painos. Hiivat ja homeet. Määrittäminen elintarvikkeista ja rehuista NMKL 5, 2001. Aerobiset mikrobit ja alustava Enterobacteriaceae. Laskeminen pinnoilta ja välineistä. NMKL 184, 2006. Kokonaispesäkeluku ja spesifiset pilaajabakteerit kalassa ja kalatuotteissa. Ei todennäköisesti uusita - asia varmistetaan NMKL 154, 2006. Fusarium. Määrittäminen elintarvikkeista ja rehuista. Uusitaan NMKL 86, 2006. Aerobiset mikro-organismit. Määríttäminen elintarvikkeista 30 C, 20 C tai 6,5 C 23

NMKL PCR analyysien laadunvarmistusohjeistus Yleinen osuus Validointiosuus PCR-tutkimusten käynnistäminen ja ylläpitäminen laboratoriossa laadunvarmistuksen näkökulmasta Työryhmän puheenjohtaja Ruotsista, jäsenet muista pohjoismaista, Saija Hallanvuo Suomesta Työ käynnissä, tarkkaa julkaisuajankohtaa ei tiedossa 24

Mahdollisesti uusittavia ohjeistuksia Uusimistarpeen arviointi ensimmäisen kerran 2 v kuluttua toisen kerran 5 v kulutta No 23, 2008. Laadunvarmistus mikrobiologisissa laboratorioissa Ei uusitatarvetta 25

Uuusittavia NMKL- ja ISO- menetelmien vastaavuus 2073/2005 Uusitaan Erityisesti kiinnitetään huomiota siihen tasoon, millä menetelmät vastaavat toisiaan 26

27

Elintarvikkeiden mikrobiologiset vaarat opas päivitetty Ilmestyi toukokuussa 2010 Päivitys oppaasta vuodelta 2003 Osoite oppaaseen: http://www.evira.fi/portal/fi/evira/julkaisut/?a=vie w&productid=122 Voit ladata ilmaiseksi tai ostaa painetun version hintaan 16,37 28

Evira.fi - vertailulaboratoriosivut Vertailulaboratoriotoimintaa koskevat sivut on uudistettu Löytyvät uuden Evira.fi etusivun vasemmassa reunassa näkyvän linkin Toiminta > Laboratoriotoiminta alta Osoite: http://www.evira.fi/portal/fi/evira/esittely/toiminta/laboratori otoiminta/ Siirretään tulevaisuudessa extranettiin, jonne pääsee vain salasanalla Palaute tervetullutta: webmaster@evira.fi 29