Enemmän selektiivisyyttä kromatografia-analytiikkaan. Liisa Kanner. 2012 Waters Corporation 1



Samankaltaiset tiedostot
PIKAMENETELMÄT ELINTARVIKKEEN RASVAPITOISUUDEN MÄÄRITTÄMISESSÄ

ALKOHOLIT SEKAISIN KOHDERYHMÄ:

Desialotransferriinimääritys kapillaarielektroforeesilla

ALKOHOLIT SEKAISIN TAUSTAA

Liuottimien analytiikka. MUTKU-päivät 2016, Jarno Kalpala, ALS Finland Oy

LC-MS JA MASSASPEKTROMETRIAN MONET KÄYTTÖTARKOITUKSET KLIINISESSÄ KEMIASSA

Seosten erotusmenetelmiä

KROMATOGRAFIAN PERUSTEET

ANTITROMBOOTTISTEN LÄÄKEAINEIDEN ENANTIOMEERIEN KROMATOGRAFINEN FRAKTIOINTI

Orgaanisten epäpuhtauksien määrittäminen jauhemaisista näytteistä. FT Satu Ikonen, Teknologiakeskus KETEK Oy Analytiikkapäivät 2012, Kokkola

Uusi ejektoripohjainen hiilidioksidin talteenotto-menetelmä. BioCO 2 -projektin loppuseminaari elokuuta 2018, Jyväskylä.

Aeromon. Lentävät rikkimittarit 40. Ilmastonsuojelupäivät Lappeenranta, Airborne Emission Monitoring. Jouko Salo Hall.

ProVent Rakennusmateriaaliluokituksen mukaiset emissiomittaukset

Päätös Dnro / /2017. Lääkealan turvallisuus- ja kehittämiskeskuksen päätös

25/10/ ,2 Dichloro Ethane ,2-Dichlorethan Reincst ,4 Dioxane

Biodiesel Tuotantomenetelmien kemiaa

Kertakäyttöiset Minisartruiskusuodattimet

METABOLISTEN SAIRAUKSIEN ANALYTIIKAN JÄRJESTÄMINEN NORDLAB OULUSSA. Marja-Kaisa Koivula Sairaalakemisti, FT, dosentti

ALKOHOLIEN TUNNISTUS KAASUKROMATOGRAFIAN AVULLA

!"## "$! % & $ $ " #$ " '( $&

AKKREDITOITU TESTAUSLABORATORIO ACCREDITED TESTING LABORATORY

HSC-ohje laskuharjoituksen 1 tehtävälle 2

O OH OH LiAlH 4 + OH OH 10% 90% Sharplessin. Asymmetrinen. epoksidointi. Jacobsenin. asymmetrinen H N. epoksitointi. N Resoluutio

Uudella vedenpuhdistuslaitteella valmistat puhtaan juoma- ja käyttöveden merestä tai järvestä. Laite on suunniteltu kestämään jatkuvaa ammattikäyttöä.

AKKREDITOITU TESTAUSLABORATORIO ACCREDITED TESTING LABORATORY

Supporting Information

Online DGA mittausteknologiat. Vaisala

780301A TUTKIMUSHARJOITTELU: ORGAANISEN KEMIAN LABORATORIO-OSUUS TYÖLUENTO SYKSY 2015

TIES483 Epälineaarinen optimointi

SUPPLEMENTARY INFORMATION

HPLC kurssit. Kolme UUTTA yhden päivän kurssia HPLC kromatografisteille. Phenomenex sponsoroima. Ongelmanratkaisu HPLC analytiikassa.

ALKOHOLIPITOISUUDEN MÄÄRITYS OLUESTA KAASUKROMATOGRAFIL- LA

Mitkä ovat aineen kolme olomuotoa ja miksi niiden välisiä olomuodon muutoksia kutsutaan?

Nopea, hiljainen ja erittäin taloudellinen ilmanpoisto

Metra ERW 700. Energialaskuri

Biometaanin tuotannon ja käytön ympäristövaikutusten arviointi

Räjähdysaineita sisältävien maanäytteiden esikäsittelymenetelmien

POHJOISMAINEN ELINTARVIKKEIDEN METODIIKKAKOMITEA NORDIC COMMITTEE ON FOOD ANALYSIS

MUTKU-PÄIVÄT Hämeenlinna

Kajaani Lab -hanke. TP1. Kainuun luonnon biomassat Loppuseminaari Mari Jaakkola

AKKREDITOITU TESTAUSLABORATORIO ACCREDITED TESTING LABORATORY

Backup Exec 3600 Appliance

Putken korjaus ja huolto

Sumuttimet ja paineruiskut

Mitä elämä on? Astrobiologian luento Kirsi

Kehittyneet polttoainekierrot UUDET EROTUSTEKNIIKAT

TIES592 Monitavoiteoptimointi ja teollisten prosessien hallinta. Yliassistentti Jussi Hakanen syksy 2010

VILLE HEINONEN KAASUKROMATOGRAFISEN MENETELMÄN KEHITTÄMINEN JA ALUSTAVA VALIDOINTI POLYMEERIMATERIAALIEN LAKTIDIPI- TOISUUDEN MÄÄRITYKSEEN

ÖLJYNJAKELULAITTEET PAINEPISTE OY

KAAPELIN SUOJAAMINEN SUOJAMATOLLA

Kumit ääriolosuhteissa mitkä ovat ääriolosuhteet? Minna Poikelispää, Maija Hoikkanen, Jyrki Vuorinen Kumi-instituutin syysseminaari TTY 9.11.

Ympäristöanalytiikan uudet sovellukset vesistöjen vierasaineiden määrityksessä

Sekoituksen merkitys kemikaalien syötössä

Uudella vedenpuhdistuslaitteella valmistat raikkaan juomaveden mökillä, saaressa tai veneessä.

PK-yrityksen kokemuksia KaivosVV:stä ja mitä

Voitelulaitteen kannessa olevalla säätöruuvilla voidaan ilmaan sekoittuvan öljyn määrä säätää helposti.

CoreLine High-bay ensiluokkainen valon laatu sekä alhaiset energia- ja huoltokustannukset

Mitä ovat ioniset nesteet eli suolasulat?

Literature Review for the Indicative Ballast Water Analysis Methods

Betoni&Muovimatto&Kosteus asiantuntijaseminaari ja työpaja Sekundaariset Päästöt ja mittaus

Opas kunnonvalvontaan. Osanumero: DD _FI_Rev Parker Hannifin Corporation

Futura kuivaimen edut takaavat patentoidut tekniset ratkaisut

Tilavuusvirta maks. 160 l/min Paine maks. 11 bar OILFREE.AIR

Virtually Oy. Laadukas tyynysarja vaativaan käyttöön IMMOBILISAATIO. Arpegia. y-tunnus: puh.

Advanced Materials Araldite TUOTESELOSTE

AJONEUVOTEKNIIKAN KEHITTYMINEN JA UUSIEN ENERGIAMUOTOJEN SOVELTUMINEN SÄILIÖKULJETUKSIIN. Mika Jukkara, Tuotepäällikkö / Scania Suomi Oy

Advanced Materials Araldite TUOTESELOSTE

LÄÄKEAINEEN IDENTIFIOINTI, PITOISUUS JA HAJOAMISTUOTTEIDEN MÄÄRÄT. Menetelmän kehitys ja validointi

Väriaineiden määritys elintarvikkeista LC-MS/MS-tekniikalla

Ammattitason tuotteet vaativaan käyttöön

Mika Jukkara, Tuotepäällikkö / Scania Suomi Oy. Biokaasu, Biodiesel, HVO vai Sähkö raskaan liikenteen käyttövoimana

Ammattikeittiöiden paloturvallisuus

Laboratorioanalytiikan kehittyminen

CoreLine High-bay ensiluokkainen valon laatu sekä alhaiset energia- ja huoltokustannukset

Kon HYDRAULIIKKA JA PNEUMATIIKKA

SEMINAARI SFS:SSÄ UUDET YHTEISET STANDARDIT YMPÄRISTÖANALYTIIKKAAN? PENTTI MANNINEN

Käytännön kokemuksia osallistumisesta EU projekteihin. 7. puiteohjelman uusien hakujen infopäivät 2011

Advanced Materials Araldite 2015 TUOTESELOSTE

Advanced Materials Araldite 2031 TUOTESELOSTE

Metallien 3D-tulostus uudet liiketoimintamahdollisuudet

Luomun ympäristövaikutukset maa, ilma, vesi ja eliöstö

HITSAUKSEN TUOTTAVUUSRATKAISUT

Puhtaan kaasun fysikaalista tilaa määrittävät seuraavat 4 ominaisuutta, jotka tilanyhtälö sitoo toisiinsa: Paine p

Nanoteknologian mahdollisuudet lääkesovelluksissa

Asumisterveysasetuksen soveltamisohje kemialliset epäpuhtaudet


AKKREDITOITU TESTAUSLABORATORIO ACCREDITED TESTING LABORATORY

Teknologia jalostusasteen työkaluna. FENOLA OY Harri Latva-Mäenpää Toimitusjohtaja Seinäjoki

Advanced Materials Araldite 2022 TUOTESELOSTE

Supporting Information

Parisiin sopimus vs. Suomen energia- ja ilmastostrategia 2030

sdsfsf Tuotteemme ammattikeittiöiden astianpesukoneisiin

ICP-OES JA ICP-MS TEKNIIKAT PIENTEN METALLIPITOISUUKSIEN MÄÄRITYKSESSÄ. Matti Niemelä, Oulun yliopisto, kemian laitos

Asumisterveysasetuksen soveltamisohje haasteet haihtuvien orgaanisten yhdisteiden (VOC) osalta

Efficiency change over time

OPINPOLKU 6 HAIHDUTUS, TISLAUS JA REFRAKTOMETRIA

Avaruus- eli stereoisomeria

Transkriptio:

UPC 2 UltraPerformance Convergence Chromatography Enemmän selektiivisyyttä kromatografia-analytiikkaan Liisa Kanner 2012 Waters Corporation 1

Erilaiset erotustekniikat Gas Chromatography Liquid Chromatography Convergence Chromatography GC HPLC SFC Capillary GC UPLC UPC 2 2012 Waters Corporation 2

UltraPerformance Convergence Chromatography Convergence Chromatography on kromatografinen erotustekniikka, joka on vaihtoehtoinen neste- tai kaasukromatografialle. UltraPerformance Convergence Chromatography [UPC 2 ] Alusta asti uudelleen suunniteltu kromatografialaitteisto, jossa eluenttina käytetään hiilidioksidia,co 2. Erotuksen selektiivisyys vastaa normaalifaasierotusta, mutta sopii erinomaisesti myös käänteisfaasitekniikaksi. ACQUITY UPC 2 Laite perustuu UPLC tekniikkaan ja mahdollistaa haastavimmatkin erotukset luotettavasti ja nopeasti. 2012 Waters Corporation 3

Why The Name? Giddings, J.C. (1965) A critical evaluation of the theory of gas chromatography. In Gas Chromatography. 1964, edited by A. Goldup, p. 3-24. Elsevier, Amsterdam In this article Dr. Giddings stated One of the most interesting features of ultra high pressure gas chromatography would be convergence with classical liquid chromatography. Prof. Calvin Giddings (1930-1996) 2012 Waters Corporation 4

Näytteenkäsittely Useimmiten näytteenkäsittely koetaan hankalaksi ja kalliiksi ja siitä haluttaisiin päästä niin vähällä kuin mahdollista. Useimmissa näytteenkäsittely prosesseissa päädytään orgaaniseen liuottimeen. neste/neste, Soxhlet, tislaus, haihdutus ja uudelleen liuotus Useat matriisit vaativat orgaanisen liuottimen (geelit, rasvat, öljyt, synteeseissä käytetyt liuottimet) solvents, etc.) image from dyapharma.com image from sefetec.net image from tasnee.com 2012 Waters Corporation 5

Näytteeenkäsittely Drying Grinding SFE Soxhlet Extraction Evaporation SPE Distillation Macro Micro Liquid / Liquid 2012 Waters Corporation 6

UPC2 Gas Chromatography pyrethroids Convergence Chromatography Reversed-phase LC carbamates STEP 1 SPE Extraction (Florisil) SPE Extraction (Oasis HLB) STEP 2 Elution in hexane/ethyl acetate Direct Analysis on UPC 2 Elution in methanol STEP 3 STEP 4 STEP 5 STEP 6 Evaporate to dryness Reconstitute in cyclohexane Derivatize sample Ready for analysis Convergence Chromatography Eliminate lengthy evaporation and reconstitution steps No need for derivatization Evaporate to dryness Reconstitute in water Ready for analysis 2012 Waters Corporation 7

Kromatografiset erotustekniikat Erotus saadaan aikaa lämpötilagradientilla Gas Chromatography GC Hyvä tehokkuus [N] Käytännössä ei ole rajoituksia kolonnin pituuden suhteen Rajoittunut selektiivisyys[α] Vähän vaihtoehtoja stationäärifaasiksi Liquid Chromatography LC Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla Hyvä tehokkuus[n] Paine rajoittavana tekijänä Suhteellisen hyvä selektiivisyys [α] Paljon erilaisia muotoja ja stationäärifaaseja: RP, NP, SEC, IEX, affiniteetti, ionipari, HILIC, GPC etc. CC Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla Hyvä tehokkuus[n] Eluentin CO2 alhainen viskositeetti mahdollistaa pidemmät kolonnit ja pienemmät partikkelit Convergence Chromatography Hyvä selektiivisyys[α] Paljon erilaisia stationäärifaaseja ja liuotinvaihtoehtoja eluentiksi 2012 Waters Corporation 8

Kaasukromatografian kehitys GC Capillary GC Sen jälkeen kun kapillaarikolonnit otettiin käyttöön luvulla, on vain vähä tapahtunut GC maailmassa. Gas Chromatography *2 *3 *1 Vain vähän kehitystä GC-tekniikassa viimeisen 30 vuoden aikana 2012 Waters Corporation *1: image from Restek.com *2: image from teaching.shu.ac.uk *3: image from soils.org 9

Nestekromatografian kehitys LC UltraPerformance LC [UPLC] Siirtyminen UPLC-tekniikkaan 2004 on muuttanut nestekromatografian suorituskykyä huomattavasti, parantaen resoluutiota, herkkyyttä ja nopeutta Liquid Chromatography ACQUITY UPLC I-Class laitteisto LC erotuksen tehokkuutta (N) on parannettu pienentämällä laitteistojen tilavuutta ja kolonnien partikkelikokoa Plates/meter 500,000 450,000 400,000 350,000 300,000 250,000 200,000 150,000 100,000 50,000 0 100% more efficiency than 3.5 µm 70% more efficiency than 1.7 µm 30,000 psi 18,000 psi 130,000 psi 5 µm 3.5 µm 1.7 µm 1.4 µm 1.0 µm Particle Size 2012 Waters Corporation 10

SFC:n kehitys SFC UltraPerformance Convergence Chromatography Convergence Chromatography UltraPerformance Convergence Chromatography on SFC laitteiston ja kolonnien kehityksen tulos. 2012 Waters Corporation Data courtesy of Davy Guillarme, Jean-Luc Veuthey LCAP, University of Geneva, Switzerland 11

UPC 2 :n sovellettavuus Nopeat kiraaliset erotukset AU 0.48 0.36 0.24 0.12 0.00 UPC² 0.3 min Nopeat kiraaliset erotukset Koko analyysi prosessi on nopeampi Eluenttien valmistukseen ja näytteenkäsittelyyn kuluva aika on lyhyempi Kolonnien käyttöikä on pidempi Eluenttien kulutus on vähäisempää ja käytettävät eluentit ovat edullisempia 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 Minutes NPLC 11 min A U 0.30 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 Minutes Kannattaa siirtyä UPC 2 tekniikkaaan Tulokset vähintään yhtä hyviä kuin perinteisellä NP kromatografialla Analyysiaiaka 1/30 Eluenttien kulutus 1/75 135 µl MeOH vs 10 ml heksaani/etanoli 2012 Waters Corporation 12

UPC 2 :n sovellettavuus Korvaa normaalifaasi tekniikan Kun normaalifaasiteknologia korvataan UPC 2 :llä Eluenttien valmistukseen ja näytteenkäsittelyyn kuluu vähemmän aikaa Kolonnien käyttöikä pitenee Eluentikustannukset ovat huomattavasti alhaisemmat ACQUITY UPC² 15 min Cost per run ~ $0.05 Kannattaa siirtyä UPC 2 tekniikkaaan Tulokset vähintään yhtä hyvät Analyysiaika vähnenee ainakin 3:s osaan Kustannukset per analyysi 5.89 $:sta, 5 senttiin. 0.0020 0.0018 0.0016 0.0014 0.0012 0.0010 Normal Phase HPLC 50 min Cost per run ~ $5.89 30.856 AU 0.0008 0.0006 0.0004 35.819 0.0002 6.237 10.855 20.850 26.632 0.0000-0.0002-0.0004 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 Minutes 2012 Waters Corporation 13

UPC 2 :n monipuoliset käyttömahdollisuudet Non-ionic surfactants Kemianteollisuus A B C D E F G H I Lääkeaineanalytiikka, epäpuhatusmääritykset Paracetamol and impurities 4-hydroxyacetophenone p-nitrophenol 2-hydroxyacetophenone 4-chloroacetanilide acetanilide phenacetin 3-aminophenol paracetamol 2-aminophenol Chiral pesticides Permethrin Ympäristöanalytiikka Elitarvikeanalytiikka Vitamin E isomers 2012 Waters Corporation 14

Perustuu UPLC tekniikkaaan Huomattava lisäys selektiivisyyteen kromatografiassa 2012 Waters Corporation 15

UPC 2 UPC 2 teknologiassa voidaan hyödyntää kaikkia normaalifaasin selektiivisyys ominaisuuksia Ortogonaalinen käänteisfaasikromatografialle Pääasiallinen eluentti CO 2, ei juurikaan tarvita normaalifaasianalytiikassa käytettäviä haitallisia eluentteja. UPC 2 soveltuu monille yhdistetyypeille 80-85% käänteisfaasilla erotettavista yhdisteistä voidaan erottaa myös UPC 2 :lla Jos yhdiste liukenee orgaanisenn liuottimeen, se sopii analysoitavaksi UPC 2 :lla Useimmat orgaaniset suolat Vahvat orgaaniset hapot ja emäkset Pienet rasvaliukoiset peptidit Poolittomat (esim., vahat ja öljyt ) Sopii erinomaisesti isomeerien stereoisomeerien diastereomeerien ja kiraalisten yhdisteiden erotukseen. Detektoreiksi sopivat: UV, PDA, ELSD, CD, MS, FID 2012 Waters Corporation 16

Mitä on superkriittinen neste? Neste/kaasu Lisätään lämpötilaa ja painetta Kriittinen piste Lisätään lämpötilaa ja painetta Superkriitinen neste Korkea diffuusio ja alhainen viskositeetti josta seurauksena nopea ja tehokas kromatografia 2012 Waters Corporation 17

UPC 2 tekniikan periaatteet HPLC:n kaltainen erotustekniikka Normaalisti nestekromatogrfaiassa käytettävä heikko eluentti (vesi) on korvattu hiilidioksidilla CO 2 Eluenttina on superkriittinen neste + yksi tai useampia eluenttipareja CO 2 on yleisin superkriittinen eluentti Metanoli on yleisin eluenttipari Erotus on normaalifaasikromatografia kaltainen Substance Critical Temp o C Critical Pressure (bar) Comments Carbon Dioxide 31 74 Physical state easily changed Water 374 221 Extreme conditions needed Methanol 240 80 Extreme temperature needed Ammonia 132 111 Highly corrosive Freon 96 49 Environmentally unfriendly Nitrous Oxide 37 73 Oxidizing agent 2012 Waters Corporation 18

Liuottimien valinta Supercritical CO 2 Heikko Vahva Normaali faasi Solvent Pentane, Hexane, Heptane Solvent Strength Eluotropic Value [E o ] Polarity [P ] 0 0.1 Xylene 0.22 2.5 Toluene 0.22 2.4 Diethyl ether 0.29 2.8 Dichloromethane 0.30 3.1 Chloroform 0.31 4.1 Acetone 0.43 5.1 Dioxane 0.43 4.8 THF 0.48 4.0 MTBE 0.48 2.5 Ethyl acetate 0.48 4.4 DMSO 0.50 7.2 Acetonitrile 0.52 5.8 Isopropanol 0.60 3.9 Ethanol 0.68 4.3 Methanol 0.73 5.1 Water 10.2 Superkriittinen CO 2, jota käytetään UPC:ssä liukenee kaikkiin eluotrooppisen sarjan liuottimiin, minkä takia on mahdollista käyttää laajaa joukkoa erilaisen selektiivisyyden omaavia eluentteja Normaalifaasi UPC 2 Käänteisfaasi 2012 Waters Corporation 19

Stationäärfaasi Selektiivisyys vaihtoehdot Stationary Phase Choices Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano Aminopropyl Diol Normaalifaasi UPC 2 UUPC 2 kromatografia hyödyntää sekä normaali, että käänteisfaasi kromatografian kolonnikemioita, jolloin on käytettävissä laaja selektiivisyysalue Amide PFP Phenyl Käänteisfaasi C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 20

Selektiivisyytenn vaikuttavat työkalut RP ja NP kromatografiassa Eluentti Pentane, Hexane, Heptane Xylene Toluene Diethyl ether Dichloromethane Chloroform Acetone Dioxane THF MTBE Ethyl acetate DMSO Acetonitrile Isopropanol Ethanol Methanol Normaalifaasi Huomioitava eri liuottimiem mahdollinen liukenemattomuus toisiinsa Käänteisfaasi Kiinteäfaaasi Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano Aminopropyl Diol Amide PFP Phenyl C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 21

Selektiivisyyten vaikuttavat työkalut UPC 2 kromatografiassa Eluentit Pentane, Hexane, Heptane Xylene Toluene Diethyl ether Dichloromethane Chloroform Acetone Dioxane THF MTBE Ethyl acetate DMSO Acetonitrile Isopropanol Ethanol Methanol UPC 2 Melkein kaikki nestekromatorafiassa käytetttävät liuottimet ja kolonnifaasit Kiinteäfaasi Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano Aminopropyl Diol Amide PFP Phenyl C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 22

Selektiivisyyten vaikuttavat työkalut UPC 2 kromatografiassa Eluentti Pentane, Hexane, Heptane Xylene Toluene Diethyl ether Dichloromethane Superkriittinen CO 2 Heikko Kiinteäfaasi Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano Chloroform Acetone UPC 2 Aminopropyl Dioxane THF MTBE Ethyl acetate DMSO Acetonitrile Isopropanol Vahva Melkein kaikki nestekromatorafiassa käytetttävät liuottimet ja kolonnifaasit Diol Amide PFP Phenyl Ethanol Methanol Orgaaninen liuotin C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 23

ACQUITY UPC 2 laitteisto: Enemmän selektiivisyyttä : CSH PFP 0.048 0.036 ACQUITY UPC 2 CSH Fluoro-Phenyl 1.7 µm B C API A U 0.024 0.012 A D (1,2) E F G H 0.000 : HSS C18 SB 0.048 ACQUITY UPC 2 HSS C 18 SB 1.7 µm A U 0.036 0.024 0.012 A B C D F G E H API 0.000 A U : BEH HILIC 0.048 0.036 0.024 0.012 ACQUITY UPC 2 Hybrid 1.7 µm A B C D G E API F* H 0.000 A U : 2-EP 0.048 0.036 0.024 0.012 ACQUITY UPC 2 Hybrid 2-EP 1.7 µm A B C G D E API H F 0.000 0.00 0.60 1.20 1.80 2.40 3.00 3.60 4.20 4.80 5.40 6.00 Minutes 2012 Waters Corporation 24

UPC 2 kromatografia: Lisää selektiivisyyttä haastaviin erotuksiin Superkriitinen CO 2 Heikko Stationary Phase Silica / BEH Rasvaliukoiset vitamiinit 2-ethylpyridine Cyano % Orgaaninen Aminopropyl Diol Amide PFP Orgaaninen liuotin Vahva Phenyl C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 25

UPC 2 kromatografia: Rasvaliukoiset vitamiinit 1.04 α-tocopherol 0.489 Vitamin E isomers ACQUITY UPC 2 BEH Analyysiaika nopeampi verrattuna käänteis- ja normaalifaasierotuksin UPC 2 sopii hyvin erilaislle valmisteille AU 0.78 0.52 γ-tocopherol 0.763 o Öljypohjaisille, jauhoille ja tableteille δ-tocopherol Näyte voidaan injektoida suoraan uutttoliuoksessa 0.26 β-tocopherol 0.695 0.893 0.00 0.00 0.12 0.24 0.36 0.48 0.60 0.72 0.84 0.96 1.08 1.20 Minutes AU 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 Vitamin A acetate Vitamin A palmitate ACQUITY UPC 2 HSS C 18 SB retinol 1.00 0.75 AU 0.50 trans-vitamin A palmitate AU 0.024 0.018 0.012 0.006 0.000 ACQUITY UPC 2 HSS C 18 SB Vitamin D3 cholecalciferol 6.8 6 2 0.25 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 7.80 8.00 8.20 8.40 8.60 8.80 9.00 Minutes 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 0.00-0.05 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 2012 Waters Corporation Minutes Minutes 26 0.25 cis-vitamin A palmitate Vitamin D3 cholecalciferol

UPC 2 kromatografia: Lisää selektiivisyyttä haastaviin erotuksiin Superkriittine n CO 2 Heikko Kiinteäfaasi Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano % Orgaaninen Lipidit Aminopropyl Diol Amide PFP Orgaaninen liuotin Vahva Phenyl C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 27

UPC 2 kromatografia: Pooliset ja neutraalit lipidit Neutraalit ja pooliset lipidit UPC 2 :lla voidaan yhdellä menetelemällä erottaa eri lipidiryhmiä, kun GC.llä ja RPLC.llä voidaan erottaa vain yksi ryhmä kerrellaan Hyvä erotuskyky sekä ryhmien välille, että piikeille ryhmän sisällä Selektiivinen monille biologisille uutteille PC TAG PE SM LPC TAG: Triacylglycerides PE: Phosphotidylethanolamine PC: Phosphotidylcholine SM: Sphynogomyelin LPC: Lysophosphotidylcholine 2012 Waters Corporation 28

UPC 2 kromatografia: Neutraalit lipidit ESI- FFA TAG mix ESI+ CE mix All mix 2012 Waters Corporation 29

Lisää selektiivisyyttä haastaviin erotuksiin luonnontuotteiden analyyseissä Superkriittinen CO 2 heikko Kiinteäfaasi Silica / BEH 2-ethylpyridine Cyano % Orgaaninen Luonnontuotteet Aminopropyl Diol Amide PFP Orgaaninen liuotin Vahva Phenyl C 18 < C 8 2012 Waters Corporation 30

UPC 2 kromatografia: Luonnontuotteet Anthemis nobilis (kamomilla) Kamomilla Luonnontuotteiden määritys on erityisen hankalaa johtuen näytteiden monimutkaisuudesta 0.20 0.15 1 3 Usein tarvitaan ortogonaalinen erotus, jotta voidaan varmistaa näytteen karakterisointi Näytteiden uuttoliuokset on injektoitavissa sellaisenaan UPC 2 kolonniin AU 0.10 0.05 2 1. apigenin-7-o-glucoside 2. chamaemeloside 3. apigenin 0.00 0.00 2.20 4.40 6.60 8.80 11.00 13.20 15.40 17.60 19.80 22.00 Minutes 2012 Waters Corporation 31

UPC 2 kromatografia: Luonnontuotteet 1.6x10 6 1.2x10 6 UPC 2 MS tekniikalla analysoitu käyttäen sekä LC että SFC tekniikkaa Intensity 8.0x10 5 * XIC of m/z=475 UPC 2 tekniikalla löytyi uusi isobaarinen komponentti 4.0x10 5 0.0 4.62 5.28 5.94 6.60 7.26 7.92 8.58 9.24 9.90 10.56 Minutes 320000 UPLC joka puuttuu UPLC-RP kromatogrammista 240000 Intensity 160000 80000 0 11.60 11.80 12.00 12.20 12.40 12.60 12.80 13.00 13.20 13.40 13.60 13.80 14.00 14.20 14.40 14.60 14.80 15.00 15.20 15.40 2012 Waters Corporation 32 Minutes

Binolin kiraalinen erotus 0.06 NPLC Rs=1.67 AU 0.04 0.02 Experimental Conditions AU 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 1.00 0.80 0.60 UPC 2 Rs=2.61 0.40 0.20 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 Minutes 2012 Waters Corporation 33

Edut kiraalisessa UPC² erotuksessa BINOLin enantiomeerien erotus alle 2:n minuutin Waters ACQUITY UPC² laitteistolla UPC² on 9 kertaa nopeampi kuin NPLC Ympäristön kannalta parempi vaihtoehto Ei tarvita heksaania Paljon pienemmät analyysikustannukset $2.85/analyysi NPLC :llä vs. $0.08/analyysi for UPC²:lla o Nopeampi o CO 2 ja metanoli ovat halpoja liuottimia 2012 Waters Corporation 34

Pienet partikkelit kiraalisissa erotuksissa AU 0.48 0.36 0.24 0.12 0.00 Warfarin UPC² IB3 (2.1 50 mm, 3 µm) 15% methanol 3 ml/min 120 bar Total analysis time: 18 s 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 0.30 Minutes Perustuu ACQUITY laitteistoon UPC² systeemin tilavuus on n. 66 µl UPC² systeemin dispersio on n. 25 µl 2 ml/min virtauksella o ACQUITY UPLC : dispersio on n.16 µl o Alliance :n dispersio on 40 µl Pienempi dispersio UPC²:lla vähentää vyöhykkeen leviämistä AU 0.30 NPLC AD-H (4.6 150 mm, 5 µm) 70/30 hexane/ethanol 1 ml/min Nopeampi erotus vähentää kustannuksia huomattavasti 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 Minutes 2012 Waters Corporation 35

Enantiomeeri-epäpuhtaudenepäpuhtauden määritys UPC²:lla AU 0.20 R S R S =7.28 O OH (R) O OH (S) 0.00 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 Minutes O Benzyl Mandelate O AU 0.004 0.002 R S 0.000 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 Minutes Analyte Benzyl mandelate Isomer R- S- Retention t R (min) 0.933 1.344 Std. Dev. 0.00179 0.00283 % RSD 0.23 0.21 Peak area Peak area (µv*sec) 593374 594972 Std. Dev. 2815.47 2986.23 % RSD 0.47 0.50 2012 Waters Corporation 36

Parempi kvantitointi R- ja S-benzyl mandelaatin enantiomeerit n. 1,5 minuutissa Waters ACQUITY UPC² laitteistolla Erinomainen toistettavuus < 0.23% RSD retentiolle < 0.5% RSD piikin pinta-alalle Parempi detektointi herkkyys mahdollistaa 0.02 prosenttisen enantiomeeri epäpuhtauden määrityksen Parempi pumppu Laite suunniteltu siten, että paineenvaihtelu on melkein olematon Detektorissa hyvä lämpötilakontrolli o Vähemmän altis ympäristön lämpötilan muutoksille Injektioventtiili erikoisesti UPC²:een suunniteltu, koska pulssin oltava mahdollisimman pieni 2012 Waters Corporation 37

R, S-methamfetamiinien erotus UPC 2 menetelmällä Kiraalinen erotus 5:ssä minuutissa 0.004 Rs=1.84 1 2 Huomattavasti nopeampi kuin GC tai CE A U 0.000 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 Minutes Optimoitu metamfetamiinin UPC 2 ckromatogrammi 1: S-MA 2: R-MA 2012 Waters Corporation 38

Methamfetamiinin ja sen lähtöaineiden erotus AU 0.002 0.000 1 2 3 4 R/S enentiomeerisuhde antaa arvokasta tietoa metamfetamiinin lähtöaineista, maantieteellisestä alkuperästä sekä valmistuksen tasosta. R, S-enantiomeerien ja kahden yleisen lähtöaineen erotus 6:ssa minuutissa. 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Minutes UPC 2 UV kromatogrammi 1: S-MA 2: R-MA 3: (1S,2S)-pseudoephedrine 4: (1R, 2S)-ephedrine. 2012 Waters Corporation 39

UPC 2 Sovelluksia Pharmaceutical Food/Env Chemical Materials Clinical Chiral drugs Transfer from USP methods Fat-soluble vitamins Lipid analysis Achiral impurity analysis Chiral pesticides Explosives OLEDs Azo dyes Non-ionic surfactants Polymer additives Drugs of abuse Vitamin D metabolites Carotenoids Positional isomers Steroids Extractables and leachables Reaction monitoring Library screening DMPK/Bioanalysis Natural products Metabolomics Glycerides PAH Lubricants Steroids 2012 Waters Corporation 40

ACQUITY UPC² System 2012 Waters Corporation 41

Yhteenvetona ACQUITY UPC 2 teknologia käyttää kompressoitua hiilidioksidia (CO 2 ) pääasiallisena eluenttina ja sopii hyvin sekä rutiini, että monimutkaisempiin analyyseihin, etenkin näytteisiin jonka komponentit edustavat laajaa poolisuusaluetta. UPC 2 tarjoaa erinomaisen työkalun perinteisten LC ja GC tekniikoiden tilalle/rinnalle UPC 2 tekniikka perustuu luotettavaan UPLC teknologiaan. UPC 2 tarjoaa poikkeuksellisen paljon mahdollisuuksia selektiivisyyden lisäämiseksi ja näin ollen se soveltuu monille erilaiselle yhdistetyypeille 80-85% yhdisteistä, joita analysoisaan RPLC tekniikalla voidaan analysoida UPC 2 -tekniikalla Mikä tahansa yhdiste, joka liukenee orgaaniseen liuottimeen sopii analysoitavaksi UPC 2 -tekniikalla. 2012 Waters Corporation 42

ACQUITY UPC 2 System 2012 Waters Corporation 43