T101-TESTI MAIDON ANTIBIOOTTIJÄÄMIEN OSOITTAMISEEN Testauksen taustaa Antibioottijäämät maidossa ovat ei-toivottuja sekä kuluttajan että maidonjalostuksen kannalta. Antibiootille herkistyneelle kuluttajalle jäämät voivat aiheuttaa allergisia reaktioita ja pienienkin antibioottimäärien jatkuva nauttiminen saattaa aiheuttaa antibioottia sietävien bakteerikantojen kehittymisen. Vaikka em. riskit ovat pienet, ovat ne kuitenkin olemassa olevia. Maidon jalostuksen kannalta antibioottijäämät aiheuttavat ongelmia hapanmaitotuotteiden ja juustojen valmistuksessa, koska hapatebakteerien kasvu ja toiminta estyy. T101-testi pohjautuu antibioottiherkkään Streptococcus thermophilus T101-hapatebakteeriin. Kasvaessaan maidossa T101-bakteeri tuottaa maitohappoa maitosokerista (laktoosi). Muodostuva happo reagoi testin sisältämän ph-indikaattorin kanssa, jolloin maidon väri muuttuu harmaankeltaiseksi. Jos T101-bakteeri ei kasva eikä tuota happoa maidossa, väri säilyy sinisenä. T101-testin suurimmat edut - Testillä voidaan osoittaa kaikki hoidoissa käytetyt antibiootit. - Testissä käytetty bakteeri on meijerituotteissa yleisesti käytetty hapatebakteeri ja täten testi varmistaa hapatteen kasvatuksen onnistumisen. - Maidon kuumennus poistaa maidossa luonnostaan olevien, testibakteerin kasvua estävien, tekijöiden vaikutuksen testiin. - Testi on helppo tehdä ja tulos on helppo lukea. - T101-testi on saatavilla testipulloversiona (tilakäyttö, laboratoriot) sekä mikrotiitterilevymuodossa (laboratoriot). T101-TESTI TILAKÄYTÖSSÄ I ENSIPAKKAUS TILALLE - Sisältää lämpöhauteen, kuumennustelineen pipeteille, 10 testipulloa, joissa bakteerikanta ja ph-indikaattori on kylmäkuivattuna, sekä 10 kertakäyttöpipettiä. II TÄYDENNYSPAKKAUS - Sisältää 10 testipulloa ja 10 kertakäyttöpipettiä. T101-testi säilytetään jääkaapissa (alle 10 C) ja käyttöaika on 1 vuosi valmistuspäivästä. Erätunnus ja viimeinen käyttöpäivä on merkitty pakkaukseen. Testiä ei saa säilyttää korkeammassa lämpötilassa, koska tällöin bakteeri kuolee tai heikkenee ja aiheuttaa siten virheellisesti positiivisen tuloksen testissä. TESTIN KÄYTTÖ T101-testillä voidaan osoittaa antibioottijäämiä yksittäisen lehmän maidosta ja tilatankki- tai siilomaidosta. Antibioottijäämien testaus T101- testillä tulee tehdä antibiootin varoajan päätyttyä. Antibiootin varoaikaa tulee noudattaa aina, koska T101-testibakteeri ei tunnista kaikkia antibiootteja sallittu enimmäismäärä (MRL) -tasolla (kts. kohta T101-testin herkkyys). Varoaikana maitoa ei saa lähettää meijeriin. Hoidetun yksittäisen lehmän maito testataan varoajan päätyttyä T101-testillä. T101-testillä puhtaaksi todetun maidon saa lähettää meijeriin. Testissä tulee olla vertailuna antibiooteista vapaa terveen lehmän maito. Maitonäytteen kuumennus poistaa maidon omien kasvua estävien aineiden vaikutuksen testiin. Tästä huolimatta, varsinkin tulkittaessa yksittäisen lehmän maitonäytteen tuloksia, tulee ottaa huomioon epänormaalista maidosta tai muista tekijöistä johtuva positiivisen tuloksen mahdollisuus (kts. kohta Virhe mahdollisuudet). Positiiviset tulokset testataan aina uudelleen T101-testillä. Erityisissä ongelmatapauksissa maitonäyte (2 x 300 ml) toimitetaan oman meijerin neuvojan tai kunnan virkaeläinlääkärin kautta varmistustutkimuksiin. 1

NÄYTTEENOTTO-OHJEITA ERI ANTIBIOOTTIHOITOTAPOJEN YHTEYDESSÄ Maidon tutkiminen aloitetaan antibiootin varoajan päätyttyä. Yhdistelmähoidoissa varoaika yleensä pitenee. Tuubihoito yhteen tai useampaan neljännekseen Hoidetusta neljänneksestä otetaan näyte neljänneksen kokonaismaidosta. Hoitamattomista neljänneksistä näyte tulee ottaa yhden tai useamman neljänneksen yhteismaidosta. Suositeltavin tapa on testata kaikkien neljännesten yhteismaitonäyte, kun hoidetun neljänneksen varoaika on päättynyt. Antibioottilääkitys ruiskeena lihakseen tai laskimoon Maitonäyte otetaan kaikkien neljännesten yhteismaidosta. Yhdistelmähoito (tuubit ja ruiskeet lihakseen/laskimoon) Yhdistelmähoidoissa varoaika yleensä pitenee. Antibioottijäämien tutkiminen aloitetaan varoajan päätyttyä. Näyte otetaan kaikkien neljännesten yhteismaidosta. Umpeenpanohoito Umpeenpanon yhteydessä antibiooteilla hoidetun lehmän maidon jäämättömyys tulee aina varmistaa. Testaus T101-testillä voidaan aloittaa, kun viisi vuorokautta on kulunut poikimisesta. Näyte otetaan kaikkien neljännesten yhteismaidosta. Epänormaali maito Ulkonäöltään epänormaali maito tai maito, jossa CMT-testillä syntyy hitaasti häviävä tai pysyvä saostuma (CMT-luku 3 tai yli 3), voi antaa T101- testillä positiivisen tuloksen, vaikka siinä ei olisikaan antibioottijäämiä. Tulehdusmaidoissa on tavallista runsaammin testibakteerien kasvua estäviä aineita. TULOKSEN LUKEMINEN Maitonäytteen lisäyksen jälkeen testibakteerit kasvavat lämpöhauteessa 42 o C:ssa 4,5 tunnin ajan. Tulos luetaan värikartan avulla. Jos maidossa ei ole antibioottia testin herkkyysrajoja ylittävää määrää, maidon väri muuttuu harmaankeltaiseksi (tulos negatiivinen). Maitonäytteen väri pysyy sinisenä, jos testi tunnistaa maitonäytteessä antibioottia tai muuta kasvua estävää ainetta (tulos positiivinen). Tulos tulee lukea 4,5 tunnin kuluttua heti lämpöhauteesta oton jälkeen. Jos näytteitä pidetään hauteessa esimerkiksi viisi tuntia, muuttuvat testin herkkyysrajat ja voidaan saada virheellisesti puhdas tulos. T101-testin herkkyys Testibakteerin herkkyysrajat hoidoissa käytetyille antibiooteille on esitetty taulukossa. T101-TESTIN LAADUNVARMISTUS Jokainen valmistuserä testataan viimeiseen käyttöpäivään asti penisilliinin, oksitetrasykliinin ja dihydrostreptomysiinin suhteen. Testauskertoja on vähintään kuusi/erä. Myyntiluvan saa vain tuotteen laatuvaatimukset täyttävä valmistuserä: herkkyyden tulee olla ilmoitetun mukainen ja inkubointiajan 4,5 tuntia. Laadunvarmistustodistus toimitetaan pyydettäessä. VIRHEMAHDOLLISUUDET Mahdolliset käsittelyvirheet testin tekemisessä sekä epänormaali maito voivat antaa virheellisesti positiivisen testituloksen. Maidon omat testibakteerin kasvua estävät aineet eivät vaikuta testiin, koska maitonäyte kuumennetaan. Mahdolliset käsittelyvirheet testin tekemisessä - Jos maitonäytteen määrä vaihtelee selvästi pipetissä. Maitonäytteen oikea määrä on 2 ml. Noin 0,5 ml liian vähän maitoa (1,5 ml) aiheuttaa vihertävän, jopa sinertävän tuloksen. 2

Antibiootti MRL-arvo mg/ml T101- testin herkkyysrajat mg/ml G- penisilliini 0,004 0,002-0,004 Ampisilliini 0,004 0,01-0,03 Amoksisilliini 0,004 0,03-0,05 Kloksasilliini 0,03 0,1-0,15 Oksasilliini 0,03 0,15-0,2 Kefaleksiini 0,05-0,1 Streptomysiini 0,2 1,0-1,5 Dihydrostreptomysiini 0,2 1,0-1,5 Enrofloksasiini 1,0-1,5 Neomysiini 0,5 0,3-0,5 Oksitetrasykliini 0,1 0,2-0,3 Trimetopriimi 0,05 2,0-5,0 Sulfat 0,1 0,5-1,5 MRL (Maximum Residue Limit) = Aineen sallittu enimmäismäärä, joka on asetettu toksikologisten tutkimusten perusteella. T101-testi tunnistaa MRL-tasolla seuraavat antibiootit: penisilliini G, neomysiini, spiramysiini ja keftiofuri. - Jos liian kuumaa maitoa pipetoidaan pulloon. Tällöin testibakteeri kuolee ja testitulos on positiivinen (sininen). Kuumennettu maitonäyte tulee jäähdyttää huoneenlämpöiseksi ennen testin aloittamista. - Jos maito lisätään pulloon hyvin kylmänä, voi tulos olla vihertävä. Maidon tulee olla huoneenlämpöistä testiä aloitettaessa. - Jos maito on liian vanhaa, tiettyjen antibioottien teho on voinut alentua hajoamisen johdosta (virheellisesti negatiivinen tulos). Maito on voinut myös hapantua säilytyksen aikana (keltainen, negatiivinen tulos). - Jos testipulloja on varastoitu liian lämpimässä paikassa (muutama tunti patterilla tai auringossa), on testitulos positiivinen (sininen). Säilytä testipullot aina jääkaappilämpötilassa (alle 10 C). - Avaamattomissa testipulloissa on kylmäkuivavattu bakteerimassa ja lisäksi pulloissa tulee olla vakuumi, jotta ne ovat käyttökelpoisia. Ulkonäöltään epäilyttäviä testiampulleja ei saa käyttää. - Jos lämpöhauteen lämpötila on liian alhainen tai liian korkea. Oikea lämpötila on 42 + 1 o C. Tarkista tai tarkistuta lämpöhauteen lämpötila tarvittaessa. Lämpötilan voi tarkistaa laittamalla tyhjään ampulliin vettä ja mittaamalla veden lämpötila noin kymmenen minuutin kuluttua kalibroidulla lämpömittarilla. - Jos testi on luettu väärään aikaan. Oikea testiaika on 4,5 tuntia. - Jos testipullot ovat vanhentuneita. Katso viimeinen käyttöpäivä pakkauksesta. Epänormaalista maidosta tai muista tekijöistä johtuvat väärät tulokset - Jos maito on koostumukseltaan poikkeavaa, soluluku on hyvin korkea ja/tai kemiallinen koostumus on muuttunut (voimakkaasti tulehtuneen neljänneksen maito tai umpeen menevän lehmän maito) tai bakteeripitoisuus on korkea, testitulos voi olla epäluotettava. Esimerkiksi, jos hoito ei ole tehonnut ja tulehdusprosessi jatkuu, voi T101-testi antaa positiivisen tuloksen ilman antibioottijäämiä. Hoidon onnistuminen tulee testata solutestillä tilalla. 3

- Maidon voimakas lipolyysi eli rasvan hajoaminen kylmässä viihtyvien psykrotrofisten bakteerien vaikutuksesta (maidon happoluku on tällöin yli 1) tai rasvan muokkautuminen voi aiheuttaa virheellisen tuloksen. - Tietyt antibiootit voivat tarttua vaurioituneeseen utarekudokseen ja saattavat erittyä jopa 2-3 kuukautta maitoon. - Pesu- ja desinfektioainejäämät aiheuttavat vain suurina määrinä positiivisia reaktioita. - Antiseptiset vedinvoiteet sekä mikrobilääkkeitä sisältävät voiteet ja sumutteet voivat aiheuttaa runsaasti käytettynä positiivisen tuloksen. POSITIIVISEN TULOKSEN VARMISTAMINEN Positiiviset tulokset tulee aina varmistaa testaamalla maitonäyte uudelleen T101-testillä. Jos testauksessa ilmenee ongelmia, ensisijassa tulee ottaa yhteys oman meijerin neuvojaan. Neuvojan kanssa selvitetään, ettei positiivinen tulos johdu esimerkiksi tulehdusmaidosta tai käsittelyvirheistä testin tekemisessä. Erityisissä ongelmatapauksissa maitonäyte (2 x 300 ml) toimitetaan oman meijerin neuvojan tai kunnan virkaeläinlääkärin kautta varmistustutkimuksiin Eläinlääkintä- ja elintarvikelaitokseen ja Valio Oy:n T&K-Palveluihin. Varmistus antibioottijäämien esiintymisestä saadaan kemiallisella menetelmällä. Ongelmanäytteiden yhteyshenkilö Valio Oy:ssä Anja Valjus Valio Oy, T&K-Palvelut PL 30 00039 Valio puh. 010 381 3116 4 T101-testiä voi tilata testituotannosta. Yhteyshenkilö: Marja-Liisa Kangasalusta Valio Oy, T&K-Palvelut, Hapatetuotanto PL 80 00039 Valio puh. 010 381 2901 Valio Oy/gp/otp 1000. 12.98