Kestopreparaatin tekeminen. Antti Haarto

Transkriptio

1 Kestopreparaatin tekeminen Antti Haarto

2 Genitaalien rakenne

3

4

5 Esiesivalmistelut Koiraat Levitystä tehtäessä vaikeasti määritettäviltä lajeilta kannattaa levittää myös sivulämssät genitaaleista Sivulämssien levitys tehdään puristamalla neuloilla genitaalien edestä ja avaamalla sivulämssät neuloilla Usein määrityksen pystyy varmistamaan levitetyistä genitaaleista Naaraat Ei voi tehdä mitään

6 Ennen preparoinnin aloittamista Varmistettava, että käytettävissä on Mikroskooppi (mielellään läpivalaisu) Kirjallisuutta Kaliumhydroksidia (KOH) 10 % -liuos Euparalia Vedetöntä alkoholia Preparaattilaseja Koeputkia ja vesihaude Tarrapaperia Pinsetit, neulat, ruiskut,

7 Vaihe 1 (alustus) Irrotetaan takaruumis varovasti Nostamalla sitä ylöspäin Leikkaamalla irti Upotetaan takaruumis n. 50 % alkoholiin niin pitkäksi ajaksi, että se kostuu läpi (uppoaa)

8 Vaihe 2 (liuotus) Upotetaan takaruumiit koeputkessa olevaan 10 % -kaliumhydroksidiliuokseen Keitetään vesihauteella min tai Annetaan liueta kylmässä yön yli Kun takaruumiit ovat pehmeitä ja läpikuultavia, niin poistetaan ne koeputkesta

9 Vaihe 3 (huuhtelu) Huuhdellaan hieman happamalla vedellä (etikka-tai sitruunahappoa pari pisaraa 100 ml vettä) ja sen jälkeen puhtaalla vedellä Kannattaa huuhdella hyvin, että lipeä saadaan kokonaan pois näytteestä Jäljelle jäänyt lipeä liuottaa näytettä vielä kestopreparaatissakin!

10 Vaihe 4 (irrotus) Koiraalla irrotetaan genitaalit varovasti takaruumiista ja puhdistetaan Aedeagus irrotetaan, jos tarpeen Naaraalla nahka poistetaan varovasti, jotta bursae säilyttää muotonsa Huudellaan välillä vedellä tai 10 % -alkoholilla

11 Vaihe 5 (värjäys) Ennen määritystä genitaalit voidaan värjätä Koiraat: Merkurokromin ja Eosiini-Y:n 2 % - vesiliuos Naaraat: Chlorazolblack E 1 % -liuos joko 70 % - alkoholissa tai puhtaassa vedessä Värjäys tehtävä varovasti, jotta genitaaleista ei tule liian tummia

12 Vaihe 6 (vesica) Aedeaguksen tyveen leikataan pieni reikä Reiästä työnnetään tylpäksi hiotulla neulalla vesicaa eteenpäin Tylpäksi hiotulla injektioneulalla ruiskutetaan vettä tai Chlorazol blacke 1 % -vesiliuosta ja samalla pidetään pinseteillä kiinni aedeaguksesta Ruiskutus joudutaan tekemään yleensä useamman kerran Viimeinen ruiskutus alkoholilla (kovettaminen)

13 Vaihe 7 (määritys) Puhdistettua ja vielä selvästi kolmiulotteista genitaalia verrataan kirjallisuuteen Genitaalia pystyy tällöin kääntelemään ja hakemaan tunnistamisen kannalta parhaan asennon Tässä vaiheessa genitaaleista kannattaa ottaa valokuva

14 Vaihe 8 (kuivaus) Asetetaan genitaalit hyvään asentoon aluslasin päälle ja asetetaan peitinlasi päälle Usein bursaejoudutaan puhkaisemaan ja litistämään Peitinlasin toiseen reunaan imupaperi ja vastakkaisesta reunasta ruiskutetaan vedetöntä alkoholia. Vesi korvautuu alkoholilla ja genitaalit kovettuvat. Kuivaukseen menee 5-15 min riippuen koosta Genitaalit on pidettävä koko ajan märkänä, ettei niihin pääse ilmaa sisään

15 Vaihe 9A (kiinnitys) Otetaan peitelasi pois kuivan genitaalin päältä ja peitetään se sopivalla määrällä Euparalia. Yleensä laitetaan peitelasi uudestaan päälle, mutta se voidaan jättää pois Euparalia lisätään nesteen (alkoholi) haihtuessa, jotta peitelasin alle ei tule ilmaa tai genitaalien pinta ei tule paljaaksi

16 Vaihe 9B (säilytys) Kuivattu genitaali laitetaan putkeen, jossa on glyserolia Putki laitetaan perhosen alle neulaan Saatavana on valmiita putkia tai ne tehdään itse silikoniputkesta, jonka päihin laitetaan pala alveoliittia Genitaalit säilyvät kolmiulotteisina Glyseroli kuivuu ajan myötä

17 Vaihe 9C (muoville) Vähemmän tärkeiden yksilöiden genitaalit voidaan kiinnittää euparalilla muovilevylle Muovilevy genitaaleineen laitetaan perhosen kanssa samaan neulaan Esim. Alliopsis atronitens (Diptera) genitaalit kiinnitettynä muovilevylle

18 Vaihe 10 (etiketöinti) Kaksi valkoista tarrapaperia preparaattilasiin Ylempään normaalit etikettitiedot Alempaan preparaatin numero (löydyttävä myös yksilön neulasta) Preparaatin tekijä ja vuosi Määritys (laji auktoreineen) Sukupuoli Kiinnitysaine (esim. Euparal)

19 Ei niin kuin minä olen tehnyt Vaan näin