verihiutalaisiin vaikuttavan hoidon käyttäminen TIAkohtauksen tai lievän iskeemisen aivohalvauksen uusimisen estämisessä (PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA AND MINOR ISCHEMIC STROKE) BIOMARKKEREITA KOSKEVAN LISÄTUTKIMUKSEN VERINÄYTTEENOTTOPROTOKOLLA Yhdysvaltojen ulkopuolella DNA ja plasma
SISÄLTÖ I. DNA- JA PLASMANÄYTTEEN PROTOKOLLA... 2 1. KÄYTTÖPAIKAN VAATIMUKSET DNA- ja PLASMANÄYTTEEN KERÄÄMISEEN... 2 2. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN NÄYTTEENOTTOPAKKAUKSET... 2 3. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN KERÄÄMINEN JA VALMISTELU... 3 4. SENTRIFUGOINTI... 6 5. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN SÄILYTTÄMINEN... 6 6. DNA- ja PLASMANÄYTTEEN PAKKAAMINEN JA LÄHETTÄMINEN Lisätietoja on LabCorp-laboratorio-oppaassa.... 7 II. YLEISIÄ ONGELMIA/VIRHEITÄ... 7 III. LABCORPIN OSOITE NÄYTTEIDEN LÄHETTÄMISTÄ VARTEN... 8 IV. MAYO CLINICAN OSOITE NÄYTTEIDEN SÄILYTYSTÄ VARTEN... 8 V. LIITTEET... 8 Liite A: 10 ML:N LAVENTELIKORKKINEN EDTA-VERINÄYTEPUTKI... 9 Liite B: 10 ML:N PAKASTUSPUTKI JÄLJELLE JÄÄNEILLE SOLUILLE ja BUFFY COAT - KERROKSELLE... 10 Liite C: KUVA VERINÄYTTEESTÄ SENTRIFUGOINNIN JÄLKEEN... 11 Liite D: 2 ML:N PAKASTUSPUTKI PLASMALLE... 12 Sivu 1
I. DNA- JA PLASMANÄYTTEEN PROTOKOLLA 1. KÄYTTÖPAIKAN VAATIMUKSET DNA- ja PLASMANÄYTTEEN KERÄÄMISEEN Näytteiden oikea käsitteleminen ja säilyttäminen edellyttävät seuraavia tuotteita: Suositeltu (ei pakollinen) - Sentrifugi, jota voidaan käyttää 1 000 g:n sentrifugaalivoimalla ja 4 C:een lämpötilassa. Pakollinen Sentrifugi, jota voidaan käyttää 1 000 g:n sentrifugaalivoimalla. Suositeltu (ei pakollinen) - Pakastin, -70...-90 C. Näytteitä voidaan säilyttää 3 kuukautta ennen lähettämistä. Näytteet lähetetään hiilihappojäässä. Pakollinen Pakastin, -20 C, -30 C tai -40 C. Jos käytetään -20 C:een, - 30 C:een tai -40 C:een pakastinta, näytteet on lähetettävä hiilihappojäässä 4 päivän kuluessa. Hiilihappojäätä kaikkien näytteiden lähettämistä varten. (Lisätietoja hiilihappojään hankkimisesta on LabCorp-laboratorio-oppaassa). 2. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN NÄYTTEENOTTOPAKKAUKSET LabCorp Clinical Trials toimittaa näytteenottopakkaukset, jotka kootaan LabCorpilla ja lähetetään suoraan käyttöpaikkoihin kestokäyttöisessä astiassa, jossa näytteet lähetetään takaisin LabCorpille. Jokaisessa DNA- ja plasmanäytteenottopakkauksessa on tarvittavat materiaalit näytteiden keräämiseen, valmistelemiseen ja palauttamiseen LabCorp Clinical Trialsille. (Käyttöpaikkaan toimitetaan ylimääräisiä tukkutarvikkeita, jotka täydentävät näytteenottopakkauksia rikkoutumisen tai vaurioitumisen varalta.) Jokaisessa DNA- ja plasmanäytteenottopakkauksessa on seuraavat tuotteet: TUOTE MÄÄRÄ LOMAKKEET Laboratoriatestin pyyntölomake, viivakoodi 1 ] VERINÄYTTEENOTTOTARVIKKEET Verinäytteenotto: 1 a. 1-10 ml:n laventelikorkkinen EDTA-putki (tyhjiöputki), viivakoodi b. 1-10 ml:n pakastusputki buffy coat -kerrokselle ja jäljelle jääneille soliulle, viivakoodi c. 6-2 ml:n pakastusputket plasmalle, viivakoodit d. 1- Alkoholiliina e. 1- Neula f. 1- Puristusside g. 1- Sidetaitos h. 1- Side Sivu 2
i. 1- Steriloimattomia pipettejä Biovaarallisen näytteen pussi 1 LÄHETYSTARVIKKEET Pakkauslaatikko (lähetyslaatikko) 1 Etukäteen maksettu ja esipainettu lentorahtikirja 1 Styroksinen kuljetuslaatikko 1 Dry Ice -lähetysetiketti HUOMAUTUS: Käyttöpaikkojen on hankittava hiilihappojäätä näytteiden lähettämistä varten Lisätietoja hiilihappojään hankkimisesta on LabCorp-käyttöoppaassa. Useita Jokaiseen näytteenottopakkaukseen sisältyy laboratoriopyyntölomake (lisätietoja on LabCorp-laboratorio-oppaassa) ja viivakoodilla merkityt tuotteet, jotka on esipainettu ja joilla onsama viivakoodinumero. Älä siirrä sisältöjä näytteenottopakkausten välillä. TARVIKKEIDEN UUSINTATILAUKSET 1. Jos haluat tilata tarvikkeita lisää, katso lisätietoja LabCorp-laboratoriooppaan pakkauksen ja tarvikkeiden uusintatilausohjeista. Kun tilaat tarvikkeita, varaa vähintään 5-7 arkipäivää tarvikkeiden kokoamista ja toimittamista varten. 3. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN KERÄÄMINEN JA VALMISTELU Verinäytteet otetaan tutkimukseen osallistumisen yhteydessä. Optimaalinen näytteenotto suoritetaan satunnaistamisen yhteydessä sen jälkeen, kun tutkittava on saanut latausannoksen. Näytteet voidaan kuitenkin kerätä jopa 12 tuntia satunnaistamisen jälkeen, jos se on välttämätöntä. Sairaalan flebotomialaboratoriota voidaan käyttää, jos tutkimuskoordinaattori ei pysty suorittamaan laskimon avausta, mutta koordinaattori on vastuussa verinäytteen kuljettamisesta laboratorioon sentrifugointia varten sekä kaikkien näytteiden pakkaamisesta ja lähettämisestä LabCorpille. ENNEN NÄYTTEENOTTOA 1. Varmista, että tutkittava on antanut tietoisen suostumuksen biomarkkeritutkimukseen. 2. Varmista, että olet valinnut oikean näytteenottopakkauksen DNA- ja plasmanäytteen ottamista varten. Sivu 3
3. Tarkista valitun näytteenottopakkauksen erääntymispäivä. (Hävitä erääntyneet näytteenottopakkaukset paikallisten käytäntöjen mukaan.) 4. Tarkista LabCorp-kalenteri LabCorp-laboratorio-oppaasta mahdollisten paikallisten ja kansallisten lomapäivien aiheuttamien kiinniolojen varalta. NÄYTTEIDEN KERÄÄMINEN JA VALMISTELU 1. Käytä laskimopunktiossa standardia steriiliä tekniikkaa. 2. Käytä vastakkaista kättä, jos käytössä on laskimonsisäinen katetri. Jos molemmissa käsissä on laskimonsisäiset katetrit, ota verinäyte suonesta, joka on distaalisesti laskimonsisäiseen katetriin nähden. 3. Kerää täyteen laventelikorkkinen EDTA-putki (liite A), joka on näytteenottopakkauksessa. 4. Käännä putkea ylösalaisin näytteenoton jälkeen vähintään 6 8 kertaa hyytymien välttämiseksi. Vältä näytteen altistamista erittäin kuumille tai kylmille lämpötiloille. Merkitse putkeen POINT-tutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero ja satunnaistamisnumero (satunnaistamisnumero on tutkimuslääkepullon numero). HUOMAUTUS: Käytä vedenkestävää kuulakärkikynää, kun täytät näytteiden etikettejä ja laboratoriopyyntölomaketta. 5. Erota plasma soluista sentrifugoimalla välittömästi tai 30 60 minuutin kuluessa näytteenotosta (lisätietoja on LabCorp-laboratorio-oppaan Sentrifugointi-osiossa). Säilytä putkia pystysuorassa ennen sentrifugointia. Jos tarvitset lisäapua sentrifugoinnin kanssa, katso LabCorp-projektinvalvonnan yhteystiedot LabCorplaboratorio-oppaasta. 6. Jos et sentrifugoinnin jälkeen näe selkeää kerrosta verisolujen, buffy coat -kerroksen ja plasman välillä, sentrifugoi näyte uudelleen. Liitteessä C on sentrifugoinnin jälkeisestä verinäytteestä kuva, jossa havainnollistetaan buffy coat -kerrosta. 7. Siirrä näytteenottopakkauksen mukana toimitetulla pipetillä 0,7 ml plasmaa laventelikorkkisesta EDTA-putkesta jokaiseen kuuteen 2 ml:n pakastusputkeen. Täytä 2 ml:n pakastusputkissa 0,7 ml:n rajaan saakka. (Liite D) HUOMAUTUS: Ole varovainen, ettet häiritse verisolujen ja plasman välissä olevaa buffy coat -kerrosta. Sinun pitäisi nähdä plasman ja solujen välillä erillinen kerros, jota kutsutaan buffy coat -kerrokseksi. Sivu 4
8. Varmista, että buffy coat -kerrosta EI pipetöidä plasman mukana. Jos osa buffy coat -kerroksesta pipetöidään plasman mukana, lisää tästä merkintä laboratoriopyyntölomakkeen alaosaan. 9. Aseta korkit plamaspakastusputkiin. 10. Merkitse kuuteen 2 ml:n pakastuspukeen POINT-tutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero ja satunnaistamisnumero (satunnaistamisnumero on tutkimuslääkepullon numero). HUOMAUTUS: Käytä vedenkestävää kuulakärkikynää, kun täytät näytteiden etikettejä ja laboratoriopyyntölomaketta. 11. Siirrä näytteenottopakkauksessa olevalla ylimääräisellä pipetillä jäljelle jääneet solut ja buffy coat -kerros 10 ml:n EDTA-putkesta 10 ml:n pakastusputkeen. 12. Aseta korkki takaisin 10 ml:n pakastusputkeen. 13. Aseta kuusi 2 ml:n plasmapakastusputkea ja jäljelle jääneiden solujen ja buffy coat -kerroksen 10 ml:n pakastusputki Aqui-Pak-pakkaukseen (6-paikkainen putkiteline, imukykyistä materiaalia). 14. Aseta Aqui-Pak biovaarallisen materiaalin pussin suurimpaan lokeroon ja sulje pussi. Aseta kopio laboratoriopyyntölomakkeesta näytepussin ulkolokeroon (säilytä kopio myös itselläsi). 15. ASETA NÄYTEPUSSI VÄLITTÖMÄSTI PAKASTIMEEN PYSTYSUORAAN ASENTOON. 16. Näytteet on säilytettävä pakastimessa, kunnes ne ovat JÄÄTYNEET, ennen kuin ne voidaan lähettää. Kun näytteet ovat jäätyneet, ne lähetetään pakastettuna hiilihappojäässä. Noudata LabCorp-laboratorio-oppaan pakkaus- ja lähetysohjeita ja lähetä 10 ml:n pakastusputki ja kuusi 2 ml:n pakastusputkea yhdessä hiilihappojäässä. 17. Jos jäljelle jääneet solut ja plasma pakastetaan -20 C:een, -30 C:een tai - 40 C:een pakastimessa, näytteet on lähetettävä hiilihappojäässä 4 päivän kuluessa 4. Jos näytteitä säilytetään -70...-90 C:een pakastimessa, niitä voidaan säilyttää enintään kolme kuukautta ennen lähettämistä hiilihappojäässä. NÄYTTEEN KERÄÄMISTÄ JA VALMISTELUA KOSKEVAT ONGELMAT Jos näytteenottopakkauksen tuote rikkoutuu tai haaskautuu, korvaa se tukkutarviketuotteella. Jokaisessa näytteenottopakkauksessa on ylimääräisiä viivakoodilla merkittyjä etikettejä. Kiinnitä yksi ylimääräisistä viivakoodilla merkityistä etiketeistä siten, että se on helppo lukea viivakoodinlukijalla (esimerkiksi pituussuunnassa putkeen). Varmista, ettei erän erääntymisen osoittava viivakoodi peity. Täytä etikettiin tarvittavat tiedot. Sivu 5
4. SENTRIFUGOINTI Soluttoman plasman valmisteleminen edellyttää verinäytteiden sentrifugoimista. Laske LabCorp-laboratorio-oppaan nomogrammin avulla näytteen sentrifugointinopeus (RPM tai kierrosta minuutissa). Nopeuden laskemista varten sinun on tiedettävä säde (etäisyys käytettävän sentrifugin keskikohdasta sentrifugoitavan putken keskiosaan) ja RCF (suhteellinen sentrifugaalivoima, josta käytetään tässä tutkimuksessa myös yksikköä g, g = 1 000). Nopeus tai RPM on laskettava kerran tietylle sentrifugille. Nopeuden määrittämisen jälkeen sentrifugoi 10 ml:n EDTA-putkea 1 000 g:ssä 15 minuutin ajan. Tämä erottaa plasman soluista. Sinun pitäisi nähdä plasman ja solujen välillä selkeä kerros, jota kutsutaan buffy coat -kerrokseksi. Ole varovainen, ettet häiritse buffy coat -kerrosta. On erittäin tärkeää, että buffy coat -kerros pysyy jäljelle jääneiden solujen kanssa, jotta sitä voidaan käyttää LabCorpilla suoritettavassa DNA-ekstraktiossa. Jos et näe selkeää kerrosta verisolujen, buffy coat -kerroksen ja plasman välillä, sentrifugoi näyte uudelleen. HUOMAUTUS: Jos tarvitset lisäapua, ota yhteyttä LabCorpin projektinvalvontaan (katso lisätietoja LabCorp-laboratorio-oppaasta). 5. DNA- ja PLASMANÄYTTEIDEN SÄILYTTÄMINEN Jäljelle jääneet solut ja plasmanäytteet on jäädytettävä käyttöpaikassa ennen lähettämistä. Näytteet säilytetään jäädytettynä -70...-90 C:ssa TAI -20 C:ssa, - 30 C:ssa tai -40 C:ssa lähetykseen saakka. Jos käytetään -20 C:een, -30 C:een tai -40 C:een pakastinta, näytteet on lähetettävä hiilihappojäässä 4 päivän kuluessa. Jos käytetään -70...-90 C:een pakastinta, näytteitä voidaan säilyttää 3 kuukauden ajan ennen lähettämistä hiilihappojäässä. Pakastimessa ollessa näytteitä on säilytettävä biovaarallisen materiaalin pusseissa pystysuorassa asennossa. HUOMAUTUS: Sekä jäljelle jääneet solut että uutettu plasma lähetetään yhdessä hiilihappojäässä. ENNEN LÄHETTÄMISTÄ 1. Varmista, että jokaisessa kuudessa 2 ml:n pakastusputkessa ja 10 ml:n pakastusputkessa on etiketti. 2. Varmista, että jokaisen 2 ml:n pakastusputken etikettiin on merkitty POINTtutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero ja satunnaistamisnumero (tutkimuslääkepullon numero). Sivu 6
3. Varmista, että 10 ml:n pakastusputken etikettiin on merkitty POINT-tutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero ja satunnaistamisnumero. 6. DNA- ja PLASMANÄYTTEEN PAKKAAMINEN JA LÄHETTÄMINEN Lisätietoja on LabCorp-laboratorio-oppaassa. 1. Kokoa lähetysmateriaalit. 2. Täytä puolet lähetyslaatikosta hiilihappojäällä. 3. Aseta näytepussi hiilihappojäähän pystyasennossa ja lisää lähetyslaatikon loppuosaan hiilihappojäätä. HUOMAUTUS: Useiden tutkittavien näytteet voidaan lähettää samassa astiassa ja niiden on pysyttävä erillisissä näytepusseissaan, joissa on mukana näytteitä vastaavat laboratoriopyyntölomakkeet. 4. Sulje lähetyslaatikko tiivisti. 5 Katso LabCorp-laboratorio-oppaasta tiedot omalle maallesi valitusta kuljetuspalvelusta sekä tarkat tiedot lentorahtikirjan täyttämisestä. Täytä lentorahtikirjat kokonaan. Rahtikirjaan on esipainettu käyttöpaikan nimi ja LabCorpin tiedot. 6. Säilytä kopio itselläsi. 7. Katso LabCorp-laboratorio-oppaasta, onko Dry Ice -etiketti kiinnitetty valmiiksi lähetyslaatikkoon vai onko sinun kiinnitettävä mukana toimitettu Dry Ice - kuljetusetiketti lähetyslaatikkoon. 9. Lähetä näyte LabCorp Clinical Trialsille. Ota yhteyttä LabCorp-laboratoriooppaassa mainittuun LabCorp-laboratorion yhteyshenkilöön, jos haluat keskustella jonkun kanssa lähetyksestä. MUISTUTUS: Näytteet voidaan lähettää LabCorp Clinical Trialsille vain MAANANTAISTA TORSTAIHIN II. YLEISIÄ ONGELMIA/VIRHEITÄ Buffy coat -kerroksen pipetöiminen plasman uuttamisen yhteydessä Jos pipetöit vahingossa osan buffy coat -kerroksesta yhteen pipeteistä, lisää merkintä siitä laboratoriopyyntölomakkeeseen. Tämä saattaa vaikuttaa biomarkkeritasojen tarkkuuteen. Sivu 7
Solujen sekä buffy coat- ja plasmakerrosten riittämätön erottuminen Sentrifugoi näyte uudelleen. Riittämätön määrä hiilihappojäätä Tämä saattaa aiheuttaa näytteiden sulamisen, mikä vaikuttaa biomarkkeritasojen tarkkuuteen. III. IV. LABCORPIN OSOITE NÄYTTEIDEN LÄHETTÄMISTÄ VARTEN Katso LabCorp-laboratorio-oppaasta MAYO CLINICAN OSOITE NÄYTTEIDEN SÄILYTYSTÄ VARTEN Mayo Clinic on vastuussa DNA- ja plasmanäytteiden pitkäaikaisesta säilytyksestä. ÄLÄ LÄHETÄ NÄYTTEITÄ SUORAAN MAYO CLINICALLE. Mayo Clinic HUOMIO: Owen Ross, PhD 4500 San Pablo Road Birdsall Room 225 Jacksonville, FL 32224 Puhelin: (904) 953-6280 V. LIITTEET Sivu 8
Liite A 10 ML:N LAVENTELIKORKKINEN EDTA-VERINÄYTEPUTKI Sivu 9
Liite B 10 ML:N PAKASTUSPUTKI JÄLJELLE JÄÄNEILLE SOLUILLE ja BUFFY COAT KERROKSELLE Esipainettu viivakoodi Varo peittämästä viivakoodia Täytä valmiiksi kiinnitettyyn etikettiin seuraavat tiedot: POINT-tutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero (SubjID) Satunnaistamisnumero (Random#) Valmiiksi kiinnitetty DNA-ekstraktion etiketti Esipainettu viivakoodi Varo peittämästä viivakoodia Täytä valmiiksi kiinnitettyyn etikettiin seuraavat tiedot: POINT-tutkimukseen osallistuvan tutkittavan tunnistenumero (SubjID) Satunnaistamisnumero (Random#) Valmiiksi kiinnitetty DNAekstraktion etiketti Sivu 10
Liite C KUVA VERINÄYTTEESTÄ SENTRIFUGOINNIN JÄLKEEN Huomautus: Ole varovainen, ettet häiritse verisolujen ja plasman välissä olevaa buffy coat -kerrosta. Sivu 11
Liite D 2 ML:N PAKASTUSPUTKI PLASMALLE Siirrä näytteenottopakkauksen mukana toimitetulla pipetillä 0,7 ml plasmaa laventelikorkkisesta EDTA-putkesta jokaiseen kuuteen plasmalle tarkoitettuun 2 ml:n pakastusputkeen. Täytä plasmapakastusputkissa 0,7 ml:n rajaan saakka. Huomautus: Ole varovainen, ettet häiritse buffy coat -kerrosta verisolujen ja plasman välillä. Jos osa buffy coat - kerroksesta pipetöidään plasman mukana, lisää merkintä tästä laboratoriopyyntölomakkeen alaosaan. Liitteessä C on sentrifugoinnin jälkeisestä verinäytteestä kuva, jossa havainnollistetaan buffy coat -kerrosta. Sivu 12