Gram-värjäykset Olli Meurman 5.2.2010
Gram-värjäys Gram-positiivinen Kiinnitys (kuumennus/alkoholi) Gram-negatiivinen Kristalliviolettivärjäys Kiinnitys jodilla Värinpoisto alkoholilla Safraniinivärjäys
Gram-värjäys Tanskalainen Hans Christian Joachim Gram, myöhemmin farmakologian ja sisätautien professori, kehitti värjäysmenetelmän alkuosan vuonna 1884 työskennellessään Berliinissä Karl Friedländerin laboratoriossa. H C J Gram (1853-1938) C Weigert (1845-1904) Muutamaa vuotta myöhemmin Frankfurtissa työskennellyt saksalainen patologi Carl Weigert kehitti värjäyksen loppuun lisäämällä siihen vastavärjäyksen safraniinilla.
Gram-värjäys Jodi muodostaa kristallivioletin kanssa liukenemattomia komplekseja, jotka vapautuvat bakteerisolusta jos soluseinämä vaurioituu. Alkoholikäsittely tekee helpommin reikiä gram-negatiivisten bakteerien seinämään, jossa peptidoglykaanikerros on ohut, kuin gram-positiivisten bakteerien seinämään. Gram-negatiivinen Gram-positiivinen kapseli teikkohappoja proteiineja polysakkarideja } ulkomembraani peptidoglykaani sytoplasminen membraani
Gram-positiivisia bakteereita Kokit Stafylokokit Streptokokit Enterokokit Sauvat Korynebakteerit Listeriat Basillukset Peptostreptokokit Klostridit Laktobasillit Aktinomykeetit Propionibakteerit
Gram-positiivisia kokkeja Stafylokokki Streptokokki Veriviljelyvärjäyksiä Pneumokokki Enterokokki
Corynebacterium Gram-positiivisia sauvoja Listeria Pesäkevärjäyksiä Clostridium Actinomyces
Gram-negatiivisia bakteereita Kokit Neisseriat Moraksellat (Branhamellat) Sauvat Enterobakteerit Pseudomonakset Hemofilukset Kampylobakteerit Veillonellat Bakteroidekset Prevotellat Porfyromonakset Fusobakteerit
Gram-negatiivisia sauvoja Enterobakteeri (E. cloacae) Pseudomonas Pesäkevärjäyksiä Fusobakteeri (F. necrophorum) Fusobakteeri (F. nucleatum)
Gram-värjäykset Mikrobien löytyminen Gramvärjäyksen lähtömateriaali Veriviljely Pesäke Potilasnäyte Lähes varma Varma Epävarma Mikrobimäärä Vaihteleva Suuri Vaihteleva, usein vähäinen Mikrobien ryhmittyminen Mikrobien lajimäärä Normaali Poikkeava Vaihteleva Yleensä yksi Yksi Vaihteleva Häiritsevä tausta Yleensä vähäinen Ei ole Usein runsas
S. aureus, pesäkevärjäys Staphylococcus aureus, veriviljely: Eri kokoisia bakteerisoluja
Str. pyogenes pesäkevärjäys Streptococcus mitis, veriviljely Str. pyogenes, veriviljely
Str. pneumoniae pesäkevärjäys Streptococcus pneumoniae, veriviljely: Selkeästi diplokokkeina esiintyviä bakteereita tai sitten ei
Neisseria meningitidis, veriviljely munuaisenmuotoinen diplokokki Neisseria lactamica, pesäkevärjäys
Gram-negatiivisia sauvoja veriviljelyssä, vasemmalta Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa, Capnocytophaga canimorsus
E. coli ja Enterococcus faecalis. Veriviljelylöydös on useimmiten monomikrobiaalinen, poikkeuksena suolistoperäiset sepsikset
C. albicans,pesäkevärjäys Candida albicans, veriviljely: Valerihmaa ja yksittäisiä soluja
Morfologian ja ryhmittelyn monimuotoisuutta
Escherichia coli on tyypillisenä lyhyt tukevahko sauva, mutta
toisinaan E. coli on niin lyhyt, että se on lähes kokkimainen
E. coli antibioottihoitoa saaneella. Bakteerin jakaantuminen on häiriintynyt ja johtanut pitkien rihmojen muodostumiseen
Haemophilus influenzae veriviljely, ohut gram-negatiivinen sauva Pesäkevärjäys, lyhyt lähes kokkimainen sauva
Campylobacter jejuni, veriviljely pitkä korkkiruuvimainen sauva Campylobacter pesäkevärjäys tyypillinen lokinsiipi muoto
Bacteroides fragilis, veriviljely lyhyt kokkimainen sauva Pesäkevärjäys, monia muotoja, mukana isoja turvonneita soluja
Veriviljely, ei streptokokki vaan Clostridium clostridioforme Pesäkevärjäys, tyypillisiä sikarinmuotoisia lyhyitä sauvoja
Gram-värjääntymisen virhelähteitä Gram-positiivinen värjäytyy gram-negatiiviseksi Gram-negatiivinen värjäytyy gram-positiiviseksi ohut valmiste paksu valmiste bakteerin stationaarinen liian kuiva lasi ennen kasvuvaihe värinpoistoa antibioottihoito kristalliviolettia näyte hangattu lasille värinpoistoliuoksessa liika kuumennus kiinnityksessä jodia värinpoistoliuoksessa liian pitkät vesipesut detergenttiä näytteessä vanhentunut jodiliuos vettä värinpoistoliuoksessa
Streptococcus pyogenes, joka on menettänyt värinsä. Tällaisia ketjuja muodostavia gram-negatiivisia kokkeja ei ole
Clostridium paraputrificum, joka värjäytyy gram-negatiiviseksi. Itiöllisiä gram-negatiivisia bakteereita ei ole
Clostridium septicum, joka värjäytyy pääosin gram-negatiiviseksi. Clostridit voivat menettää osan seinämäänsä, jolloin solu voi värjäytyä kokonaan tai osittain gram-negatiiviseksi
Escherichia coli, joka värjäytyy gram-positiiviseksi. Paksu kohta valmisteesta, jolloin värinpoisto ei ole ollut riittävä
Kliinisestä näytteestä tehdyn Gram-värjäyksen tulkinta 1. onko näyte edustava ja kelvollinen 2. löytyykö mikrobeja 3. ovatko mikrobit gram-positiivisia vai gram-negatiivisia 4. ovatko mikrobit kokkeja vai sauvoja
Nivelneste, runsas leukosyyttejä sisältävä tausta, erikokoisia väripallosia. Viljely negatiivinen
Kystaneste, niukka tausta, yksi gram-positiivinen kokkipari Viljelystä vastattu S.aureus
Vatsaonteloerite, runsas tausta, runsaasti gram-negatiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu E.coli ja B.fragilis
Krooninen haava, melko runsas tausta, gram-positiivisia kokkeja ja gram-negatiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu E.faecalis ja Ps.aeruginosa
Aivoabskessi, melko runsas tausta, runsaasti gram-positiivisia sauvoja. Viljelystä vastattu Actinomyces meyeri
Aivoabskessi, runsas tausta, runsaasti gram-positiivisia bakteereja. Viljelystä vastattu Streptococcus intermedius
Ruokatorvimärkä, melko runsas tausta, yksi värinsä osin menettänyt hiivasolu. Viljelystä vastattu Candida albicans
Rintarangan paraspinaaliabskessi, runsas tausta, värittömiä suoria tai hieman kaarevia sauvamaisia muodostumia, jotka
poissa fokuksesta näyttävät tummilta, hieman sinertäviltä sauvoilta. Näytteestä viljelty Mycobacterium tuberculosis
Useimmiten gram-värjäys on selkeä tulkittava Säännöllisin välein tulee vastaan näytteitä, joista ei uskalla sanoa juuri mitään Silloin tällöin menee kunnolla pieleen